[發明專利]一種提高L-丙氨酸生產效率的方法及其應用

有效

• 申請號: 201811344798.6
• 申請日: 2018-11-13
• 公開（公告）號: CN109468254B
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發明（設計）人: 劉立明;劉佳;羅秋玲;張權;陳修來
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12P13/06;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

1.一種大腸桿菌重組菌，其特征在于，所述大腸桿菌重組菌串聯表達ptsI基因編碼的EI蛋白和crr基因編碼的EIIA^Clc蛋白；所述大腸桿菌重組菌是對大腸桿菌FMME-A232中葡萄糖轉運路徑進行改造得到，所述大腸桿菌FMME-A232于2018年9月17日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO:M 2018628，保藏地址為中國，武漢，武漢大學；

其中，使用pEtac質粒，串聯表達ptsI基因編碼的EI轉運蛋白和crr基因編碼的EIIA^Clc轉運蛋白，構建重組質粒pEtac-EI-EIIA^Clc；將重組質粒pEtac-EI-EIIA^Clc導入大腸桿菌FMME-A232中，獲得大腸桿菌重組菌。

2.根據權利要求1所述的大腸桿菌重組菌，其特征在于，編碼所述EI轉運蛋白的ptsI基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，編碼所述EIIA^Clc轉運蛋白的crr基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.權利要求1或2所述的大腸桿菌重組菌在制備含L-丙氨酸的食品或藥品中的應用。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述應用是使用所述大腸桿菌重組菌生產L-丙氨酸。

5.一種發酵生產L-丙氨酸的方法，其特征在于，所述方法為利用權利要求1或2所述的大腸桿菌重組菌發酵生產L-丙氨酸。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法包括：將所述大腸桿菌重組菌接種于含硫酸卡那霉素100mg/L的LB培養基，37℃震蕩培養過夜，按照10～15％接種量接種于發酵培養基，前期好氧發酵，溫度26～30℃，空氣量1.0～2.0vvm，攪拌轉速300～400rpm，培養6～8h，加入4～8g/L乳糖誘導EI蛋白和EIIA^Clc蛋白表達，繼續培養至15～25h，開始限氧階段發酵，將通氣量降低至0.01～0.1vvm，攪拌轉速降低至50～100rpm，溫度上升至40～43℃，當葡萄糖消耗盡后立即結束發酵。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述發酵培養基包括：葡萄糖180～220g/L，玉米漿3～6g/L，酵母粉2～6g/L，K₂HPO₄·12H₂O 2～6g/L，KH₂PO₄ 4～6g/L，MgSO₄·7H₂O0.4～0.6g/L，一水合檸檬酸0.2～0.4g/L。