[發(fā)明專利]工程化苯丙氨酸解氨酶多肽

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811343013.3
• 申請日: 2014-04-17
• 公開（公告）號: CN109486803B
• 公開（公告）日: 2022-10-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吉伽特·W·哈思曼;尼古拉斯·J·阿加德;本杰明·米杰茨;喬納森·弗羅姆;張希云
• 申請（專利權(quán)）人: 科德克希思公司
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88
• 代理公司: 北京安信方達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11262
• 代理人: 王瑋瑋;鄭霞

1. 一種具有苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的工程化多肽，所述工程化多肽的氨基酸序列與SEQ ID NO: 4相比的氨基酸殘基差異為A39V、T54K、G59R、S73K、A91V、N290G、R305M、H307G、L407V、C503Q、Q521K、T524S、C565P；或A39V、T54K、G59R、S73K、A91V、N290G、R305M、H307G、D353A/N、L407V、C503Q、Q521K、T524S、C565P與選自下列置換中的1-5個氨基酸殘基差異的組合：R134Q、Q240W/R、Y304H、E509L和P564L/M/G；或F18H、A39V、T54K、G59R、S73K、A91V、N290G、R305M、H307G、L407V、C503Q、Q521K、T524S、C565P與選自下列置換中的1-5個氨基酸殘基差異的組合：L47A/E、L214Q、E308K/Q、F450Y、T460G、R467G、P528L、E540D和S546R；并且所述工程化多肽與參考序列SEQ ID NO: 4相比表現(xiàn)出選自以下的改進(jìn)的特性：i)增強(qiáng)的催化活性、ii)降低的對蛋白水解的敏感性、iii)增加的對酸性pH的耐受性、iv)降低的免疫原性、或i)、ii)、iii)和iv)的任何組合。

2. 如權(quán)利要求1所述的工程化多肽，其中所述工程化多肽的氨基酸序列與SEQ ID NO:4相比的氨基酸殘基差異為A39V、T54K、G59R、S73K、A91V、Q240W/R、N290G、R305M、H307G、D353A/N、L407V、C503Q、Q521K、T524S、C565P與選自下列置換中的1-4個氨基酸殘基差異的組合：R134Q、Y304H、E509L和P564L/M/G。

3. 如權(quán)利要求1所述的工程化多肽，其中所述工程化多肽的氨基酸序列與SEQ ID NO:4相比的氨基酸殘基差異為F18H、A39V、T54K、G59R、S73K、A91V、L214Q、N290G、R305M、H307G、L407V、C503Q、Q521K、T524S、C565P與選自下列置換中的1-4個氨基酸殘基差異的組合：L47A/E、E308K/Q、F450Y、T460G、R467G、E540D和S546R。

4. 一種具有苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的工程化多肽，其中所述工程化多肽的氨基酸序列與SEQ ID NO: 4相比的氨基酸殘基差異為A39V、T54K、G59R、S73K、A91V、N290G、R305M、H307G、L407V、C503Q、Q521K、T524S、C565P與選自F18H、L47A和L214Q的1-3個氨基酸殘基差異的組合；并且所述工程化多肽與參考序列SEQ ID NO: 4相比表現(xiàn)出選自以下的改進(jìn)的特性：i)增強(qiáng)的催化活性、ii)降低的對蛋白水解的敏感性、iii)增加的對酸性pH的耐受性、iv)降低的免疫原性、或i)、ii)、iii)和iv)的任何組合。

5. 如權(quán)利要求4所述的工程化多肽，其中所述工程化多肽的氨基酸序列與SEQ ID NO:4相比的氨基酸殘基差異為A39V、T54K、G59R、S73K、A91V、N290G、R305M、H307G、L407V、C503Q、Q521K、T524S、C565P與選自F18H和L47A的1-2個氨基酸殘基差異的組合。

6.一種具有苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的工程化多肽，所述工程化多肽由以下變體中的任一種的氨基酸序列組成：說明書表2-3中的變體號43-47、說明書表2-4中的變體號61、說明書表2-5中的變體號1011-1090、說明書表9-1中的變體號100-354、說明書表9-2中的變體號400-416和418-420、說明書表9-3中的變體號500-565、說明書表9-4中的變體號600-615、說明書表9-5中的變體號700-774、說明書表9-6中的變體號800-845以及說明書表9-7、說明書表9-8和說明書表9-9中的變體號900-1010。