[發(fā)明專利]通過引物組合物進(jìn)行質(zhì)譜法判別維拉帕米個(gè)體化用藥的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811342261.6
• 申請(qǐng)日: 2018-11-13
• 公開（公告）號(hào): CN111172264A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬慶偉;鐘逾
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京毅新博創(chuàng)生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12Q1/6858
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種通過如下所述的引物組合物，進(jìn)行質(zhì)譜法判別維拉帕米個(gè)體化用藥的方法，其中該引物組合包括針對(duì)能判別維拉帕米的8個(gè)SNP標(biāo)記的PCR引物對(duì)和延伸引物，其中，PCR引物序列對(duì)選自如SEQ ID NO:1a-8a所示的序列，延伸引物序列選自如SEQ ID NO:1b-8b所示的序列。

2.權(quán)利要求1所述的方法，其中該引物組合物分為4個(gè)獨(dú)立進(jìn)行的多重PCR反應(yīng)引物組合物，并且所述序列如下所示：

3.權(quán)利要求2所述的方法，其中各位點(diǎn)對(duì)應(yīng)的延伸引物及延伸產(chǎn)物分子量如下所示：

4.權(quán)利要求3所述的方法，其中上述PCR引物序列為核心序列，其在5'端可包括5-15個(gè)保護(hù)堿基序列，優(yōu)選為10bp的tag：ACGTTGGATG。

5.權(quán)利要求3所述的方法，其中延伸引物5'端可增加作為接頭的堿基序列，優(yōu)選接頭堿基序列為1-15個(gè)堿基。

6.權(quán)利要求5所述的方法，其中接頭堿基序列為1-3個(gè)堿基。

7.權(quán)利要求1-6任一所述的方法，其中包括以下步驟：

(1)多重PCR：使用上述PCR引物對(duì)，在兩個(gè)反應(yīng)體系中，對(duì)上述8個(gè)SNP位點(diǎn)所在DNA區(qū)域同時(shí)進(jìn)行擴(kuò)增，得到含8處多態(tài)位點(diǎn)所在DNA區(qū)域的PCR產(chǎn)物；

(2)PCR產(chǎn)物純化：對(duì)步驟(1)得到的PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化，以減少對(duì)后續(xù)反應(yīng)的干擾；

(3)單堿基延伸：使用上述8條特異性的延伸引物，在兩個(gè)反應(yīng)體系中，對(duì)步驟(2)得到的純化后PCR產(chǎn)物進(jìn)行多重單堿基延伸，延伸引物在對(duì)應(yīng)的SNP位點(diǎn)處延伸一個(gè)核苷酸，該核苷酸與SNP位點(diǎn)處的基因型互補(bǔ)配對(duì)；

(4)延伸產(chǎn)物純化：對(duì)步驟(3)得到的延伸產(chǎn)物進(jìn)行純化，以獲得高純的延伸產(chǎn)物，避免鹽離子等雜質(zhì)對(duì)后續(xù)檢測(cè)的影響；

(5)質(zhì)譜儀檢測(cè)：將步驟(4)得到的純化產(chǎn)物點(diǎn)在含有基質(zhì)的靶片上，放入質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)。

8.權(quán)利要求7的方法，其中步驟2的純化過程可以選自堿性磷酸酶消化、堿性磷酸酶和外切酶ExoI消化、切膠純化、PCR純化柱過柱。