[發(fā)明專利]豬流行性腹瀉病毒M蛋白特異性重鏈抗體

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811341948.8
• 申請日: 2015-12-25
• 公開（公告）號: CN109517060B
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 尹雙輝;楊順利;尚佑軍;蔡建平;劉湘濤
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 甘肅省知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)中心 62100
• 代理人: 張克勤

本發(fā)明公開了一種豬流行性腹瀉病毒M蛋白特異性重鏈抗體，編碼所述抗體的核苷酸序列為：SEQ ID NO.3。本發(fā)明的效果在于：利用噬菌體展示技術(shù)構(gòu)建PEDV M蛋白雙峰駝源免疫文庫，篩選獲得8株來自雙峰駝IgG重鏈抗體高變區(qū)抗M蛋白VHH抗體基因編碼序列，對其進(jìn)行可溶性表達(dá)和ELISA實驗證明其均可以同M蛋白相結(jié)合，吸光度OD405值的不同表明其同M蛋白結(jié)合能力各有差異。8株VHH抗體可通過E.coli的表達(dá)，而制備體外重組的基因工程抗體。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及以一種豬流行性腹瀉病毒M蛋白單域抗體。

背景技術(shù)

豬流行性腹瀉（Porcine Epidemic Diarrhea,PED）是由豬流行性腹瀉病毒（PEDV）感染引起的豬的一種高度接觸性腸道傳染病。感染PEDV的病豬主要通過糞便傳播病毒，發(fā)病豬主要表現(xiàn)腹瀉、嘔吐和脫水等臨床特征，是導(dǎo)致哺乳仔豬死亡的主要傳染病之一。1971年，PED首次在英國發(fā)生，隨后擴(kuò)散到世界各地。我國于1980年首次分離到PEDV，2010年國內(nèi)大部分養(yǎng)豬地區(qū)發(fā)生PED疫情，從哺乳仔豬到繁殖母豬均有發(fā)病，給養(yǎng)豬戶造成了嚴(yán)重地經(jīng)濟(jì)損失。PEDV屬于尼多病毒目(Nidovirales)冠狀病毒科(Coronavi ridae)冠狀病毒屬(Coronav irus)，基因組是單股正鏈具有感染性的RNA ,與其他冠狀病毒相似, 基因組5′端有一個帽子結(jié)構(gòu)(cap), 3′端有1個Poly (A)尾, 基因組全長為2,8033 nt，分別編碼S、E、M和N等4個病毒結(jié)構(gòu)蛋白。S擔(dān)保存在的中和表位能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，對仔豬具有良好的保護(hù)效果。PEDV感染早期，機(jī)體能夠產(chǎn)生抗N和N蛋白的高水平抗體，是研發(fā)病毒血清抗體診斷方法的候選抗原。E蛋白在抗病毒研究方面具有應(yīng)用前景。

駱駝屬外周血中存在的天然缺失輕鏈的重鏈抗體（variable domain of theheavy chain of HCAbs，VHH）具有其他陸生生物所不具備的生物學(xué)特征，它的抗原結(jié)合位點僅由重鏈可變區(qū)單一結(jié)構(gòu)域組成，卻同普通IgG抗體一樣保持著良好和特異的抗原結(jié)合能力。VHH是目前可以得到的、具有完整功能的、最小IgG抗體分子片段，分子量為15kDa，是常規(guī)IgG的1/10，單克隆抗體的1/3，分子高度4.8nm，直徑2.2納米，也稱為納米抗體（nanobody）。VHH抗體抗原結(jié)合位點具有伸展的抗原互補(bǔ)結(jié)合區(qū)和組織穿透性，可結(jié)合普通IgG抗體無法接觸的抗原表位。另外，體外重組VHH具有易表達(dá)和水溶性好等獨特性質(zhì)，在作為小型化基因工程抗體、小分子抗體藥物和高靈敏度診斷試劑研發(fā)領(lǐng)域具有廣闊應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種豬流行性腹瀉病毒M蛋白特異性重鏈抗體；

本發(fā)明的另一個目的是提供一種編碼所述豬流行性腹瀉病毒M蛋白特異性重鏈抗體的核苷酸序列；

本發(fā)明的再一個目的是提供所述的豬流行性腹瀉病毒M蛋白特異性重鏈抗體或其編碼序列在E.coli中的表達(dá)。

本發(fā)明采用以下技術(shù)方案，一種豬流行性腹瀉病毒M蛋白特異性重鏈抗體，編碼所述抗體的核苷酸序列為：SEQ ID NO.1，SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.3，SEQ ID NO.4，SEQ IDNO.5，SEQ ID NO.6，SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8。

一種重組表達(dá)載體，含有上述的核苷酸序列。

一種宿主細(xì)胞，所述的宿主細(xì)胞為含有上述的核苷酸序列的原核細(xì)胞。

優(yōu)選的，所述宿主細(xì)胞為含有上述表達(dá)載體的原核細(xì)胞。

所述豬流行性腹瀉病毒M蛋白特異性重鏈抗體或其編碼序列在E.coli中的表達(dá)。