[發明專利]豬流行性腹瀉病毒M蛋白特異性重鏈抗體

有效

• 申請號: 201811341946.9
• 申請日: 2015-12-25
• 公開（公告）號: CN109438574B
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發明（設計）人: 尹雙輝;楊順利;尚佑軍;蔡建平;劉湘濤
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 甘肅省知識產權事務中心 62100
• 代理人: 張克勤

本發明公開了一種豬流行性腹瀉病毒M蛋白特異性重鏈抗體，編碼所述抗體的核苷酸序列為：SEQ ID NO.4。本發明的效果在于：利用噬菌體展示技術構建PEDV M蛋白雙峰駝源免疫文庫，篩選獲得8株來自雙峰駝IgG重鏈抗體高變區抗M蛋白VHH抗體基因編碼序列，對其進行可溶性表達和ELISA實驗證明其均可以同M蛋白相結合，吸光度OD405值的不同表明其同M蛋白結合能力各有差異。8株VHH抗體可通過E.coli的表達，而制備體外重組的基因工程抗體。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及以一種豬流行性腹瀉病毒M蛋白單域抗體。

背景技術

豬流行性腹瀉（Porcine Epidemic Diarrhea,PED）是由豬流行性腹瀉病毒（PEDV）感染引起的豬的一種高度接觸性腸道傳染病。感染PEDV的病豬主要通過糞便傳播病毒，發病豬主要表現腹瀉、嘔吐和脫水等臨床特征，是導致哺乳仔豬死亡的主要傳染病之一。1971年，PED首次在英國發生，隨后擴散到世界各地。我國于1980年首次分離到PEDV，2010年國內大部分養豬地區發生PED疫情，從哺乳仔豬到繁殖母豬均有發病，給養豬戶造成了嚴重地經濟損失。PEDV屬于尼多病毒目(Nidovirales)冠狀病毒科(Coronavi ridae)冠狀病毒屬(Coronav irus)，基因組是單股正鏈具有感染性的RNA ,與其他冠狀病毒相似, 基因組5′端有一個帽子結構(cap), 3′端有1個Poly (A)尾, 基因組全長為2,8033 nt，分別編碼S、E、M和N等4個病毒結構蛋白。S擔保存在的中和表位能夠誘導機體產生中和抗體，對仔豬具有良好的保護效果。PEDV感染早期，機體能夠產生抗N和N蛋白的高水平抗體，是研發病毒血清抗體診斷方法的候選抗原。E蛋白在抗病毒研究方面具有應用前景。

駱駝屬外周血中存在的天然缺失輕鏈的重鏈抗體（variable domain of theheavy chain of HCAbs，VHH）具有其他陸生生物所不具備的生物學特征，它的抗原結合位點僅由重鏈可變區單一結構域組成，卻同普通IgG抗體一樣保持著良好和特異的抗原結合能力。VHH是目前可以得到的、具有完整功能的、最小IgG抗體分子片段，分子量為15kDa，是常規IgG的1/10，單克隆抗體的1/3，分子高度4.8nm，直徑2.2納米，也稱為納米抗體（nanobody）。VHH抗體抗原結合位點具有伸展的抗原互補結合區和組織穿透性，可結合普通IgG抗體無法接觸的抗原表位。另外，體外重組VHH具有易表達和水溶性好等獨特性質，在作為小型化基因工程抗體、小分子抗體藥物和高靈敏度診斷試劑研發領域具有廣闊應用前景。

發明內容

本發明的目的是提供一種豬流行性腹瀉病毒M蛋白特異性重鏈抗體；

本發明的另一個目的是提供一種編碼所述豬流行性腹瀉病毒M蛋白特異性重鏈抗體的核苷酸序列；

本發明的再一個目的是提供所述的豬流行性腹瀉病毒M蛋白特異性重鏈抗體或其編碼序列在E.coli中的表達。

本發明采用以下技術方案，一種豬流行性腹瀉病毒M蛋白特異性重鏈抗體，編碼所述抗體的核苷酸序列為：SEQ ID NO.1，SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.3，SEQ ID NO.4，SEQ IDNO.5，SEQ ID NO.6，SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8。

一種重組表達載體，含有上述的核苷酸序列。

一種宿主細胞，所述的宿主細胞為含有上述的核苷酸序列的原核細胞。

優選的，所述宿主細胞為含有上述表達載體的原核細胞。

所述豬流行性腹瀉病毒M蛋白特異性重鏈抗體或其編碼序列在E.coli中的表達。