[發(fā)明專利]一種脂肪干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811341162.6
• 申請日: 2018-11-12
• 公開（公告）號: CN109337866A
• 公開（公告）日: 2019-02-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 路明華;馮成寶
• 申請（專利權(quán)）人: 王曉柯
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種人脂肪干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基，主要成分包括氨基酸，無機鹽成分，生長因子及白蛋白成分。本發(fā)明提供了一種人脂肪干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基，其不含動物源成分，可以完全實現(xiàn)無血清培養(yǎng)干細(xì)胞。采用本發(fā)明的無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)人脂肪干細(xì)胞，可在體外獲得高數(shù)量、高純度并且安全優(yōu)質(zhì)的間充質(zhì)干細(xì)胞，同時可提高細(xì)胞存活率，維持干細(xì)胞的特性。本發(fā)明可解決細(xì)胞數(shù)量不夠的問題，且每批次的細(xì)胞數(shù)量、存活率及免疫表型更加穩(wěn)定。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種人脂肪干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基，屬于細(xì)胞工程技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

間質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells，MSCs）來源于中胚層，也稱多能間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞（multipotent mesenchymal stromal cells），為多能干細(xì)胞的一種，它最早發(fā)現(xiàn)于骨髓中，具有向三種胚層細(xì)胞分化的多向分化潛能，具有低免疫原性、不刺激產(chǎn)生同種異體免疫反應(yīng)、不被細(xì)胞毒性T細(xì)胞和NK細(xì)胞殺傷，以及免疫調(diào)節(jié)作用。MSCs在相應(yīng)的誘導(dǎo)條件下能分化為骨、脂肪、軟骨、肌肉和肝細(xì)胞等不同類型細(xì)胞。脂肪干細(xì)胞（adipose derivedstem cslls，ADSC）是一種存在于脂肪組織中的成體間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stemcells，MSC）。在特定誘導(dǎo)條件下可以分化為不同胚層細(xì)胞和組織。2001年脂肪干細(xì)胞首次通過吸脂手術(shù)并從人脂肪組織懸液中分離獲得。由于人脂肪組織含量豐富且容易獲得，所以脂肪干細(xì)胞是成體干細(xì)胞的又一豐富補充來源。此外，脂肪干細(xì)胞不表達(dá) II 類主要組織相容性復(fù)合體，表明脂肪干細(xì)胞具有低免疫原性的特點，適合同種異體移植。基于以上獲取簡便、來源廣泛、高分化潛能和低免疫原性等優(yōu)勢，脂肪干細(xì)胞被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞工程、組織工程、醫(yī)學(xué)等各個領(lǐng)域，并有著廣闊的發(fā)展前景。

細(xì)胞培養(yǎng)基是決定細(xì)胞體外生長代謝最重要、最直接的環(huán)境因素。目前大多數(shù)合成細(xì)胞培養(yǎng)基均需要補充動物血清才能支持細(xì)胞的體外生長、增殖。傳統(tǒng)含血清培養(yǎng)基成分復(fù)雜且不明確，無法證明其安全性，批次之間差異較大，無法滿足干細(xì)胞相關(guān)藥物及干細(xì)胞醫(yī)療的開發(fā)要求。另外，市售無血清培養(yǎng)基不僅價格昂貴，而且對于脂肪干細(xì)胞培養(yǎng)針對性不強，故而造成培養(yǎng)效果并不理想，脂肪干細(xì)胞生長緩慢且傳代不穩(wěn)定。為解決現(xiàn)存問題，我們針對于脂肪干細(xì)胞特點開發(fā)出了一種脂肪干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基，保留無血清培養(yǎng)基優(yōu)點的同時，更適合對脂肪干細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供了一種人脂肪干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基，其不含動物源成分，可以完全實現(xiàn)無血清培養(yǎng)干細(xì)胞。采用本發(fā)明的無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)人脂肪干細(xì)胞，可在體外獲得高數(shù)量、高純度并且安全優(yōu)質(zhì)的間充質(zhì)干細(xì)胞，同時可提高細(xì)胞存活率，維持干細(xì)胞的特性。本發(fā)明可解決細(xì)胞數(shù)量不夠的問題，且每批次的細(xì)胞數(shù)量、存活率及免疫表型更加穩(wěn)定。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：

一種人脂肪干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基，是由以下濃度的組分組成的，各濃度單位若無特別說明，均為mg/L：

L-精氨酸 105～305；

CuSO₄·5H₂O 0.0006～0.005；

L-天門冬酰胺28～70；

L-天門冬氨酸12～32；

L-谷氨酸 15～35；

Ni（NO₃）₂·6H₂O 0.000032～0.0003；

L-谷氨酰胺0～500；

ZnSO₄·7H₂O 0.065～0.65；

甘氨酸 5～20；