[發(fā)明專利]一種利用原位微生物培養(yǎng)法檢測水樣中RDOC含量的方法

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• 申請日: 2018-11-12
• 公開（公告）號: CN109596792A
• 公開（公告）日: 2019-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 肖瓊;賀秋芳;趙海娟
• 申請（專利權(quán)）人: 中國地質(zhì)科學(xué)院巖溶地質(zhì)研究所
• 主分類號: G01N33/18
• 分類號: G01N33/18
• 代理公司: 北京輕創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11212
• 代理人: 楊立;蔣杰

本發(fā)明涉及一種利用原位微生物培養(yǎng)法檢測水樣中RDOC含量的方法，包括如下的步驟：步驟一，準(zhǔn)備器具，并進行無菌處理；步驟二，采集水樣，并通過棕色瓶收集水樣濾液，備用；步驟三，接種液的制備；步驟四，培養(yǎng)水樣濾液得到培養(yǎng)液；步驟五，過濾培養(yǎng)液，并保留培養(yǎng)液濾液，將培養(yǎng)液濾液上機測試，得到一個水樣的RDOC含量值；步驟六，重復(fù)若干次步驟二到步驟五的操作，得到多個水樣中RDOC的含量值；步驟七，計算所有RDOC含量值的平均值即為水樣中的實際RDOC含量。該方法采用原位微生物法便于室內(nèi)培養(yǎng)測試，減少外界因素干擾，同時設(shè)置平行樣即得到多個水樣中RDOC的含量值消除原位微生物異質(zhì)性誤差，最后計算平均值保證測試結(jié)果的準(zhǔn)確性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物地球科學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種利用原位微生物培養(yǎng)法檢 測水樣中RDOC含量的方法。

背景技術(shù)

全球水生生物能夠固定巖溶水重碳酸根，使無機碳轉(zhuǎn)化為有機碳，而水 生生物生成的有機碳穩(wěn)定存在時間僅有幾十至上百年。但是，水體中異養(yǎng)微 生物利用其他生物生產(chǎn)或者剩余的有機質(zhì)，分解消耗其中的可降解部分 (BDOC)，而其中微生物不能利用的惰性DOC(RDOC)將長時間滯留水體，經(jīng) 14C測年表明其循環(huán)時間可達(dá)上千年，是構(gòu)成水體碳匯的主體。目前，惰性 有機碳的測試方法鮮有報道，而且有的測試方法沒有去除培養(yǎng)過程中微生物 產(chǎn)生的POC，同時沒有設(shè)置平行樣消除原位微生物異質(zhì)性誤差，使得測試的 RDOC值不準(zhǔn)確，因此規(guī)范統(tǒng)一測試方法具有實用價值。

發(fā)明內(nèi)容

綜上所述，巖溶水體RDOC是巖溶碳匯最終的體現(xiàn)，按季節(jié)通過取樣、 原生生物分解的方法檢測其水體中惰性有機碳(RDOC)含量，確定RDOC在 巖溶水體中的百分比，結(jié)合研究區(qū)巖石、土壤、植被、水生植物碳同位素， 分析巖溶區(qū)惰性有機碳的來源以及內(nèi)外源比例，估算出RDOC的循環(huán)時間， 直接定量計算巖溶水體中有機碳匯通量，提出陸地水體巖溶碳匯，陸地水體 RDOC碳儲提供計算方法。為尋找“遺失的匯”、國家“碳交易”談判提供科 學(xué)依據(jù)。本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供利用原位微生物培養(yǎng)法檢測水樣 中RDOC含量的方法。

本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：一種利用原位微生物培養(yǎng)法 檢測水樣中RDOC含量的方法，包括如下的步驟：

步驟一，準(zhǔn)備如下器具：棕色瓶、設(shè)置有第一濾膜的過濾裝置、三角玻 璃瓶、移液管和第二濾膜，并對上述器具進行無菌處理；

步驟二，采集水樣，并將其分成兩部分，將第一部分水樣通過所述過濾 裝置過濾后得到水樣濾液，并通過所述棕色瓶收集所述水樣濾液，備用；

步驟三，接種液的制備：將第二部分水樣中通過所述過濾裝置，然后取 出所述過濾裝置中的第一濾膜；用酒精灼燒后的剪刀剪碎第一濾膜得到碎 膜，將碎膜放入所述三角玻璃瓶，再加入與第二部分水樣等體積的無菌水后 震蕩得到接種液，備用；

步驟四，根據(jù)所述水樣濾液的體積，并按照所述水樣濾液與所述接種液 為100:1的體積比量取相應(yīng)的所述接種液，采用所述移液管將量取的所述接 種液加入到所述棕色瓶中，密封后培養(yǎng)所述水樣濾液得到培養(yǎng)液；

步驟五，通過所述第二濾膜過濾所述培養(yǎng)液，并保留培養(yǎng)液濾液，將培 養(yǎng)液濾液上機測試，得到一個水樣的RDOC含量值；

步驟六，重復(fù)若干次步驟二到步驟五的操作，得到多個水樣中RDOC的 含量值；

步驟七，計算所有RDOC含量值的平均值即為水樣中的實際RDOC含量。

本發(fā)明的有益效果是：采用原位微生物法便于室內(nèi)培養(yǎng)測試，減少外界 因素干擾，避免外來雜菌的污染，同時設(shè)置平行樣即得到多個水樣中RDOC 的含量值消除原位微生物異質(zhì)性誤差，最后計算平均值保證測試結(jié)果的準(zhǔn)確 性。

在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還可以做如下改進：

進一步，所述第二濾膜為孔徑為0.22um的聚醚砜膜。