[發明專利]一種基因探針標記試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201811337968.8
• 申請日: 2018-11-09
• 公開（公告）號: CN109504738B
• 公開（公告）日: 2019-10-15
• 發明（設計）人: 許嘉森;吳詩揚;劉志明;朱蓉;彭璨璨
• 申請（專利權）人: 益善生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文;羅堯

本發明公開了一種基因探針標記試劑盒，包括綠色熒光染料，綠色熒光染料中含有銅綠假單胞菌熒光素。本發明還公開了一種基因探針標記的方法，包括如下步驟：(1)提供氨基標記的DNA探針；(2)用納濾水溶解所述氨基標記的DNA探針，再依次加入硼酸標記緩沖液和綠色熒光染料，在室溫下避光反應6小時以上，即得。本發明的基因探針標記試劑盒采用包含銅綠假單胞菌熒光素的綠色熒光染料對基因探針標記，可以減少試驗操作過程中的非避光操作對試驗結果的影響，同時方便對檢測樣品的運輸；另一方面，采用含有銅綠假單胞菌熒光素的熒光染料，雜交后探針上的熒光強度在光照條件下可以持續更長時間而不衰減。

技術領域

本發明涉及基因探針標記技術領域，尤其是一種基因探針標記試劑盒及其應用。

背景技術

現代醫學發展至今日，對疾病的認識愈發深刻，很多種疾病的發生和發展都與基因的重組或重排有關，例如間變性淋巴瘤激酶，其編碼基因表示為ALK，首先發現于間變性大細胞淋巴瘤中，是靶向治療的重要靶標之一。ALK基因位于2號染色體上，長度為728kb，其cDNA全長含有29個外顯子，蛋白含有1620個氨基酸，分子量約為177千道爾頓(kDa)。ALK基因重排的斷裂點位于外顯子19和20之間，ALK基因發生重排后多具有生物學功能，其表達產物為嵌合酪氨酸激酶，通過Coiled Coil結構域形成多聚體，引起組成性的ALK激活，ALK信號可通過激活RAS-MEK-ERK，JAK3-STAT3和PI3K-AKT等下游信號通路持續地促進細胞增殖，導致腫瘤的產生和轉移。

銅綠假單胞菌(P.Aeruginosa)又稱綠膿桿菌，在自然界分布廣泛，為存在于土壤中的常見細菌之一，該菌是一種專性需氧型革蘭氏陰性桿菌。其最適生長溫度范圍為25～30℃，其在普通培養基上可以生存并能產生兩種水溶性的色素，一種是綠膿素(pyocynin)，無熒光性，具有抗菌作用；另一種為熒光素(pyoverdin)，呈綠色，具有顯著熒光性。

現有的ALK基因重排檢測方法中包括熒光原位雜交(FISH)技術，該方法檢測ALK基因重排具有高特異性和高準確性的優點，但是，由于熒光原位雜交技術在檢測基因重排的過程中需要使用熒光標記的基因探針，當檢測的樣本數量不多時，現有FISH技術的檢測結果中，試劑的熒光強度是足夠的，閱片人能準確地判讀雜交信號，然而，一方面，腫瘤患者數量日益增多，導致采用熒光原位雜交(FISH)技術檢測ALK基因重排的需求越來越大，由于閱片人數量有限，腫瘤患者采用FISH技術的檢測ALK基因重排的結果需要等待更長時間才會傳遞給閱片人，此時，基因檢測試劑(即探針)的熒光強度減弱，導致閱片人判讀信號的難度加大，對檢測結果的分析靈敏度也降低，出現錯誤診斷結果的可能性上升；另一方面，當醫生結合患者的其它檢測結果，對患者是否發生基因重排的結果產生懷疑，需要復檢熒光原位雜交的拍片時，如果基因檢測試劑(即探針)的熒光強度可以保持足夠長的時間，可以省去再次進行熒光原位雜交(FISH)技術檢測ALK基因重排的時間成本、人力成本和試劑成本，而現有的試劑盒中探針的熒光強度保持時間明顯不夠。

發明內容

基于上述問題，本發明的目的在于克服上述現有技術的不足之處而提供一種標記基因探針的方法，該方法標記的探針的熒光信號穩定性顯著增加，提升了基因重排檢測結果的準確性，還可以顯著降低檢測成本。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案包括以下幾個方面：

在第一個方面，本發明提供了一種基因探針標記試劑盒，所述試劑盒包括綠色熒光染料，所述綠色熒光染料中含有銅綠假單胞菌熒光素。

優選地，所述銅綠假單胞菌熒光素在所述綠色熒光染料中的質量百分含量為5～10％。

優選地，所述綠色熒光染料中還含有選自各無機和有機熒光染料中的任意一種或多種。

優選地，所述綠色熒光染料中還含有Alexa Fluor 488 NHS ester。