[發明專利]抑制RTL1基因表達的siRNA及其應用

有效

• 申請號: 201811337133.2
• 申請日: 2018-11-12
• 公開（公告）號: CN109536495B
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發明（設計）人: 喬木;彭先文;武華玉;吳俊靜;孫華;梅書棋;劉貴生;周佳偉;宋忠旭;胡華;李良華;董斌科;趙海忠
• 申請（專利權）人: 湖北省農業科學院畜牧獸醫研究所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K31/713;A61P21/00
• 代理公司: 武漢智嘉聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 42231
• 代理人: 黃君軍

本發明提供了抑制RTL1基因表達的siRNA及其應用，所述siRNA為以下三條siRNA中的至少一種：RTL1?siRNA1，其正義鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其反義鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；RTL1?siRNA2，其正義鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，其反義鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；RTL1?siRNA3，其正義鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，其反義鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述siRNA干擾小鼠RTL1基因，轉錄水平上的干擾效率達到87％；該siRNA可應用于制備預防和/或治療肌肉肥大癥產品。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，尤其涉及抑制RTL1基因表達的siRNA及其應用。

背景技術

RTL1基因(反轉錄轉座子1基因，retrotransposon-like-1)，又名父本表達基因11(paternally expressed gene 11,Peg11),在人和小鼠中為父本表達的印記基因，沒有內含子序列。RTL1基因在胚胎和胎盤組織中表達量很高，對母體胎盤與胎兒的營養傳遞起著重要作用，敲除該基因的小鼠表現為胎兒死亡率升高、新生兒生長停滯、胎盤尺寸偏小；與人的胎兒發育和新生兒的生長也有密切關系。該基因位于DLK1-DIO3印記區域，此區域基因對肌肉發育有一定的影響，在轉基因小鼠中異位表達RTL1基因，會導致肌肉肥大；此外，該基因與callipyge綿羊的肌肉肥大相關，雙肌臀的綿羊中RTL1基因的表達量是正常綿羊中的12倍。

C2C12細胞是由小鼠骨骼肌衛星細胞永生化而來的細胞株，保持著一定的增殖和分化能力，且細胞形態和特性均一，可無限代培養，體外培養的C2C12成肌細胞能在低血清誘導條件下分化為多核的肌管，并表達Myogenin和Myosin等成熟骨骼肌的各種標志蛋白，因此C2C12細胞通常成為體外研究成肌細胞增殖和分化能力的首選模型。

RNA干擾是指一種分子生物學上由雙鏈RNA誘發的基因沉默現象。該技術主要是采用與靶基因同源的20-15nt的siRNA(Small interfering RNA,siRNA),誘導靶基因mRNA特異性的降解，從而抑制基因的表達。由于其干擾效率高、操作簡便，常被用于基因功能的研究。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術之缺陷，提供了抑制RTL1基因表達的siRNA及其應用，該siRNA干擾小鼠RTL1基因，轉錄水平上的干擾效率能達到87％，干擾效率高、特異性好、操作簡便、成本低廉，為研究RTL1基因的功能奠定了基礎；本發明人發現RTL1基因能夠顯著抑制成肌細胞的增殖和分化，因而一方面，抑制RTL1基因表達的siRNA能為研究肌肉發育的表達調控機制提供新思路，另一方面，抑制RTL1基因表達的siRNA可以應用于制備預防和/或治療肌肉肥大癥產品。

為實現上述目的，本發明是這樣實現的：

本發明的目的之一在于提供了一種抑制RTL1基因表達的siRNA，其為以下三條siRNA中的至少一種：

RTL1-siRNA1，其正義鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其反義鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

RTL1-siRNA2，其正義鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，其反義鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

RTL1-siRNA3，其正義鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，其反義鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

優選地，所述siRNA為RTL1-siRNA2。

具體地，所述RTL1-siRNA1、RTL1-siRNA2、RTL1-siRNA3序列的3’端均垂懸有dTdT。

本發明的目的之二在于提供了所述的siRNA在制備預防和/或治療肌肉肥大癥產品中的應用。