[發明專利]一種重組克雷伯氏桿菌在制備1，3-丙二醇中的應用

有效

• 申請號: 201811336101.0
• 申請日: 2018-11-12
• 公開（公告）號: CN109370969B
• 公開（公告）日: 2020-09-04
• 發明（設計）人: 諸葛斌;李玉石;滕宇;陸信曜;宗紅;宋健
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/74;C12N15/31;C12P7/18;C12R1/22
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

1.一種重組克雷伯氏桿菌，其特征在于，是將來源于發酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum)的甘油通道蛋白基因glpF連接到過表達載體pEtac-28a上，將連接產物轉入克雷伯氏桿菌(Klebsiella peneumoniae )中得到的，所述甘油通道蛋白基因glpF的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根據權利要求1所述的重組克雷伯氏桿菌，其特征在于，所述過表達載體pEtac-28a是在pET-28a載體中引入了序列如SEQ ID NO.3所示的tac啟動子。

3.根據權利要求2所述的重組克雷伯氏桿菌，其特征在于，所述過表達載體pEtac-28a的構建方法為：用EcoRI和BamHI雙酶切pET28a和序列如SEQ ID NO.3所示的tac啟動子，酶切后，PCR連接得到過表達載體pEtac-28a(+)。

4.權利要求1-3任一所述的重組克雷伯氏桿菌的構建方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)從發酵乳桿菌基因組中克隆甘油通道蛋白基因glpF，其核苷酸序列如序列表SEQID NO.1所示；

(2)將glpF基因與權利要求3中的過表達載體pEtac-28a相連，并將連接產物轉化到克雷伯氏桿菌中。

5.根據權利要求4所述的構建方法，其特征在于，所述轉化采用的是電擊轉化法。

6.權利要求1-3任一所述的重組克雷伯氏桿菌在生產1，3-丙二醇中的應用。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，所述應用是以甘油為底物，以重組克雷伯氏桿菌為生物催化劑，采用分批補料的方式進行全細胞轉化。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述應用包括將菌液以4％接種量接種到5L發酵罐中，厭氧，補料分批發酵重組克雷伯氏桿菌，流加甘油，使其保持在15-30g/L，37℃，150rpm，發酵48h。

9.權利要求1-3任一所述的重組克雷伯氏桿菌在紡織、塑料及食品包裝領域的應用。