[發(fā)明專利]一種傘菌類真菌潔凈擔孢子收集方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811332343.2
• 申請日: 2018-11-09
• 公開（公告）號: CN109197398B
• 公開（公告）日: 2021-07-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孫學廣;馮萬艷;丁貴杰
• 申請（專利權(quán)）人: 貴州大學
• 主分類號: A01G18/70
• 分類號: A01G18/70
• 代理公司: 貴陽東圣專利商標事務(wù)有限公司 52002
• 代理人: 袁慶云

本發(fā)明公開了一種傘菌類真菌潔凈擔孢子收集方法，包括：用棉球蘸取70%乙醇擦拭子實體表面，從菌柄與菌蓋連接處剪掉菌柄，將菌蓋倒置于超凈臺內(nèi)；將硫酸紙對折兩次后剪掉直角，將硫酸紙展開后放入培養(yǎng)皿底部，取兩條可高壓滅菌的橡皮筋套在培養(yǎng)皿上，將菌蓋置于橡皮筋上，菌褶或菌孔朝下，蓋上培養(yǎng)皿蓋，靜置4?24小時；取走子實體菌蓋，移除橡皮筋，將硫酸紙向內(nèi)對折兩次，使載有孢子的一面位于內(nèi)側(cè)，將硫酸紙展成漏斗狀置于離心管口上方，用無菌水均勻沖洗硫酸紙內(nèi)側(cè)收集擔孢子。本發(fā)明能獲取潔凈的擔孢子，孢子回收率高，操作簡單。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體來說涉及一種傘菌類真菌潔凈擔孢子收集方法。

背景技術(shù)

擔孢子是進行傘菌類真菌分離培養(yǎng)、遺傳改良和生態(tài)習性研究的重要材料，其形態(tài)特征也是傘菌類真菌的重要鑒別依據(jù)。純凈擔孢子的收集對傘菌類真菌的研究極為關(guān)鍵。目前傘菌類真菌擔孢子的收集方法主要有套袋收集法、孢子印收集法、彈射收集法等。在擔孢子收集方法方面，李榮同等在《食用菌學報》2010年17(1)：44-47“菌核側(cè)耳擔孢子收集及萌發(fā)條件”中提到利用菌褶沖洗法收集菌核側(cè)耳擔孢子，該方法中菌褶與孢子收集液直接接觸，增大了污染幾率，另外該方法不適合含菌孔的牛肝菌屬傘菌擔孢子的收集。中國專利公開號CN103688746A于2014年04月02日公開了 “一種食用菌孢子的采集培養(yǎng)方法”，該方法為傳統(tǒng)的孢子印法，由于孢子收集過程子實體與收集紙有接觸，難以保證收集孢子的潔凈度，另外收集紙收集到的孢子難以轉(zhuǎn)移；中國專利公開號CN105039178A于2015年11月11日公開了“一種暗褐網(wǎng)柄牛肝菌擔孢子萌發(fā)的方法”，該方法將子實體組織粘附于試管內(nèi)壁，很難保證孢子的潔凈度；另外受限于試管直徑，子實體大多數(shù)孢子無法被收集；同時，試管內(nèi)收集的孢子很難進行轉(zhuǎn)移操作；中國專利公開號CN 106754624A于2017年05月31日公開了“一種靈芝擔孢子萌發(fā)的方法”，該方法收集環(huán)境相對密閉，子實體易腐敗，不適合傘菌類真菌擔孢子的收集；同時孢子收集過程與子實體接觸較多，難以獲取潔凈的擔孢子。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服上述缺點而提供的一種能獲取潔凈的擔孢子，孢子回收率高，操作簡單的傘菌類真菌潔凈擔孢子收集方法。

本發(fā)明目的及解決其主要技術(shù)問題是采用以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：

本發(fā)明的一種傘菌類真菌潔凈擔孢子收集方法，包括以下步驟：

（1）篩選成熟或近熟傘菌子實體，用棉球蘸取70%乙醇擦拭子實體表面，從菌柄與菌蓋連接處剪掉菌柄，將菌蓋倒置于超凈臺內(nèi)；

（2）根據(jù)待收集擔孢子的子實體的大小剪取直徑略大于子實體直徑的圓形硫酸紙；

（3）將硫酸紙對折兩次后剪掉直角，在硫酸紙中心形成方孔；

（4）將硫酸紙展開后放入培養(yǎng)皿底部，取兩條橡皮筋套在培養(yǎng)皿上，兩條橡皮筋平行放置，橡皮筋間距小于子實體菌蓋直徑，將菌蓋置于橡皮筋上，菌褶或菌孔朝下，蓋上培養(yǎng)皿蓋，關(guān)上超凈工作臺擋板，靜置4-24小時；

（5）取走子實體菌蓋，移除橡皮筋，將硫酸紙向內(nèi)對折兩次，使載有孢子的一面位于內(nèi)側(cè)，將硫酸紙展成漏斗狀置于離心管口上方，用無菌水均勻沖洗硫酸紙內(nèi)側(cè)，將未經(jīng)沖洗的一側(cè)重新展成漏斗狀，用無菌水沖洗硫酸紙內(nèi)側(cè)，收集擔孢子，將收集瓶或離心管蓋好后置于4 ℃保存。

上述的一種傘菌類真菌潔凈擔孢子收集方法，其中：對硫酸紙、可高壓滅菌的橡皮筋、孢子收集瓶或離心管、蒸餾水進行高壓蒸汽滅菌。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有明顯的有益效果，從以上技術(shù)方案可知：本發(fā)明通過將硫酸紙、可高壓滅菌的橡皮筋和方形培養(yǎng)皿配合使用來實現(xiàn)對傘菌類真菌擔孢子的收集。該方法獲取的擔孢子潔凈，具有操作簡單、孢子回收率高等特點。

具體實施方式

實施例1

一種傘菌類真菌潔凈擔孢子收集方法，包括以下步驟：