[發明專利]一種馬里蘭煙葉發酵提取物的制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201811331694.1
• 申請日: 2018-11-09
• 公開（公告）號: CN109536393B
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發明（設計）人: 魏敏;宋旭艷;李冉;羅誠浩;何結望
• 申請（專利權）人: 湖北中煙工業有限責任公司
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12N1/20;C12P39/00;C12P1/04;C12P1/02;C12N11/02;C12R1/645;C12R1/01;A24B3/12;A24B15/20
• 代理公司: 武漢楚天專利事務所 42113
• 代理人: 孔敏

1.一種馬里蘭煙葉發酵提取物的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)原料前處理：馬里蘭煙葉經粉碎機粉碎至40目～100目粉末；

(2)微生物菌株的活化：將扣囊復膜孢酵母Saccharomycopsis fibuligera和桑腸桿菌Enterobacter mori VL4-3的活性固體凍干菌粉，加入到10～20倍質量的滅菌處理的質量濃度為5～20％葡萄糖溶液中，置于38～50℃水浴鍋活化30～60min，得到微生物菌株活化液，其中所述的桑腸桿菌Enterobacter moriVL4-3保藏號為CCTCC NO：M2012020，于2012年2月16日保藏于武漢大學中國典型培養物保藏中心；

(3)固定化載體制備：將馬里蘭煙的煙桿洗凈烘干后處理成碎塊，高壓滅菌后烘干；

(4)微生物菌株的固定化處理：稱取上述步驟(3)滅菌烘干后的馬里蘭煙桿碎塊裝入容器，按照碎塊與活化液質量比為1:5～30加入已培養活化好的微生物菌株活化液，放置于4±0.5℃冷藏柜固定12～30h，過濾得到固定化微生物菌株的煙桿碎塊；

(5)馬里蘭煙葉的固定化發酵：將步驟(1)所得馬里蘭煙葉粉末與15～30倍質量的水混合均勻，加入步驟(4)所述固定化微生物菌株的煙桿碎塊，固定化微生物菌株的煙桿碎塊與馬里蘭煙葉粉末質量比為1:0.5～2，在溫度為40～55℃，勻速攪拌，添加乙二酸調節pH值為4.5～6.5，發酵1～5d，篩網過濾去除煙桿碎塊，微孔過濾除去馬里蘭煙粉殘渣，保留馬里蘭煙葉發酵液A；

(6)連續逆流超聲提取：將步驟(5)所得馬里蘭煙粉殘渣按速率0.1～0.8kg/10min投料至浸出艙，開啟主機和超聲波發生器，調節溫度60～100℃，料液比為質量比1:2～6，從浸出艙低端運行0.2～1h后調節出液閥門均勻放液，控制溶劑加入流量，保持浸出倉液位平衡，連續逆流超聲提取達30～60min時，投料加入占馬里蘭煙粉質量0.1～1％的中性醋酸鋁，當連續逆流超聲提取共達50～150min時，停止生產工藝，排渣，得到浸出液B；

(7)將步驟(5)的發酵液A和步驟(6)的浸出液B合并，得到馬里蘭煙發酵提取液。

2.如權利要求1所述的馬里蘭煙葉發酵提取物的制備方法，其特征在于：還包括步驟(8)：將所述馬里蘭煙發酵提取液經真空冷凍干燥得到馬里蘭煙發酵提取物。

3.如權利要求1所述的馬里蘭煙葉發酵提取物的制備方法，其特征在于：所述步驟(2)中的活性固體凍干菌粉為食品級，活性為10～20u/mg。

4.如權利要求1所述的馬里蘭煙葉發酵提取物的制備方法，其特征在于：所述步驟(3)中的馬里蘭煙的煙桿用剪刀剪成1cm長的小塊。

5.如權利要求1所述的馬里蘭煙葉發酵提取物的制備方法，其特征在于：所述步驟(5)中勻速攪拌的轉速為20～100rpm。

6.如權利要求1所述的馬里蘭煙葉發酵提取物的制備方法，其特征在于：所述步驟(6)中使用的中性醋酸鋁為分析純。

7.一種如權利要求1所述方法制備的馬里蘭煙葉發酵提取液在傳統卷煙配方煙絲加料中的應用，將馬里蘭煙葉發酵提取液和糖分、水混勻噴灑到制絲加料罐中，在40～60℃與傳統卷煙配方煙葉不停攪拌混勻，按正常卷煙工藝加工成配方煙絲，其中馬里蘭煙葉發酵提取液與煙絲質量比為0.01％或0.05％。

8.一種如權利要求1所述方法制備的馬里蘭煙葉發酵提取液在傳統煙草配方煙葉中的應用，在制絲車間加料工藝中，將馬里蘭煙發酵提取液和復合氨基酸與水、糖料混合均勻，噴灑到加料罐的煙葉上，經后續制絲工序加工成成品配方煙絲，其中馬里蘭煙發酵提取液與煙絲質量比為0.01％或0.05％，復合氨基酸與馬里蘭煙發酵提取液的質量比為0.1％，復合氨基酸由苯丙氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸按照1:0.6:1.2質量比混合而成。

9.一種如權利要求2所述方法制備的馬里蘭煙葉發酵提取物在新型加熱不燃燒卷煙煙絲中加香的應用，將所述馬里蘭煙葉發酵提取物溶解于70％乙醇溶液中，稀釋1000倍，按與煙絲0.01％的質量比加入煙絲中。