[發明專利]一種表達制備UDP-葡萄糖-己糖-1-磷酸尿苷酰轉移酶的方法有效
| 申請號： | 201811331180.6 | 申請日： | 2018-11-09 |
| 公開（公告）號： | CN109295087B | 公開（公告）日： | 2021-08-24 |
| 發明（設計）人： | 李拖平;李蘇紅;楊強;佟超男;孫玥 | 申請（專利權）人： | 沈陽農業大學 |
| 主分類號： | C12N15/75 | 分類號： | C12N15/75;C12N1/21;C12N9/12;C12R1/125 |
| 代理公司： | 沈陽杰克知識產權代理有限公司 21207 | 代理人： | 胡洋 |
| 地址： | 110000 遼寧省沈*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 表達 制備 udp 葡萄糖 磷酸 尿苷酰 轉移酶 方法 | ||
1.一種表達制備UDP-葡萄糖-己糖-1-磷酸尿苷酰轉移酶的方法，其特征在于，方法如下：
1）將UDP-葡萄糖-己糖-1-磷酸尿苷酰轉移酶基因與表達載體連接，構建重組表達載體；所述表達載體是pHT系列載體、穿梭載體pMA5或穿梭載體pWB980；所述UDP-葡萄糖-己糖-1-磷酸尿苷酰轉移酶基因的序列如SEQ ID NO:1所示；
2）將重組表達載體電轉化至宿主菌中構建重組工程菌；所述宿主菌是枯草芽孢桿菌（
3）將重組工程菌以1-10%的接種量接種于液體培養基中，于180rpm培養至OD600=0.8時，加入IPTG至終濃度為1 mM，然后在35℃、120rpm條件下誘導培養18小時，菌液離心，取上清液；所述的液體培養基是含有抗生素的LB液體培養基。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述pHT系列載體是pHT43、pHT304或pHT01載體。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述表達載體中含有蛋白純化標簽。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述蛋白純化標簽是組氨酸 (His-tag)標簽。
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