[發明專利]偽狂犬病病毒基因工程弱毒疫苗株及其應用

有效

• 申請號: 201811330929.5
• 申請日: 2018-11-09
• 公開（公告）號: CN109439634B
• 公開（公告）日: 2021-11-19
• 發明（設計）人: 王繼春;劉婭梅;張傳健;陳賽賽;喬永峰;咼明鵬;王志勝;許夢微;鄭亞婷;郭容利;侯繼波
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;A61K39/245;A61P31/22
• 代理公司: 南京匯盛專利商標事務所(普通合伙) 32238
• 代理人: 袁靜

本發明提供偽狂犬病病毒基因工程弱毒疫苗株及其應用，屬于動物醫學疫苗領域。所述疫苗株，是將偽狂犬病病毒Bartha K61株基因組中的gC基因替換為偽狂犬病病毒AH02LA株的gC基因、gD基因替換為偽狂犬病病毒AH02LA株的gD基因后獲得的，所述偽狂犬病病毒AH02LA株的gC基因序列如SEQ ID No:1所示，所述偽狂犬病病毒AH02LA株的gD基因序列如SEQ ID No:2所示。本發明疫苗株能夠很好的適應ST細胞，滴度高，安全性較高；以該疫苗株為有效成分的疫苗免疫后能夠對免疫豬只提供100%保護，該疫苗不但能阻止發病，還能顯著降低排毒率、大幅減少排毒量，排毒時間大大縮短。

技術領域

本發明屬于動物醫學的疫苗領域，具體涉及偽狂犬病病毒基因工程弱毒疫苗株及其應用。

背景技術

偽狂犬病是由偽狂犬病病毒(Pseudorabies Virus，PRV)引起的一種急性、烈性傳染病。牛、羊等家畜和犬、貓以及野生動物發生偽狂犬病時常表現為神經癥狀和奇癢等典型癥狀，伴有發熱和腦脊髓炎等臨床癥狀。豬是偽狂犬病病毒的唯一儲存宿主，豬偽狂犬病的癥狀與年齡相關，新生仔豬有神經癥狀，死亡率高；育肥豬主要是呼吸道癥狀，成年豬感染偽狂犬病毒后生長停滯，通常不發生死亡，母豬常發生流產，公豬發生睪丸炎，病毒可以通過精液傳播。PRV基因缺失株疫苗(如gE基因缺失的Bartha K61株等)配合鑒別免疫豬與野毒感染豬的PRV gE抗體的ELISA檢測方法能簡便地診斷出是否有野毒感染，可以通過持續淘汰陽性種豬建立凈化場，經過10多年的努力，世界上許多國家實現了在家養豬群中偽狂犬病病毒的凈化，在我國，2000年之后，許多豬場也逐步成功建立了PRV gE抗體陰性的豬群，不少豬場基本實現了PRV的凈化，豬偽狂犬病得到了較好控制。

自2011年以來，我國北方許多豬場大規模出現豬偽狂犬病疫情，之后疫情迅速向全國大部分養豬場蔓延，雖然豬場采取了強化免疫等措施，但PRV gE抗體陽性率居高不下，對我國養豬業造成嚴重危害。多個團隊的研究結果證明此輪疫情是由變異的PRV野毒株引起，該變異株致病性顯著增強，傳統疫苗株Bartha K61株雖然能提供臨床保護，但不能阻止免疫接種動物的排毒。

發明內容

本發明的目的是提供偽狂犬病病毒基因工程弱毒疫苗株，該毒株能夠很好的適應ST細胞，滴度高，由于該弱毒疫苗株是對Bartha K61株進行的改造，因此安全性較高。

本發明的另一目的是提供含有偽狂犬病病毒基因工程弱毒疫苗株偽狂犬病疫苗，采用該疫苗免疫后能夠對免疫豬只提供100％保護，該疫苗不但能阻止發病，還能顯著降低排毒率、大幅減少排毒量，排毒時間大大縮短，而且由于該毒株應用經典疫苗株Bartha K61株為骨架，所以該重組弱毒株的安全性好。

本發明的目的采用如下技術方案實現。

偽狂犬病病毒基因工程弱毒疫苗株，是將偽狂犬病病毒Bartha K61株基因組中的gC基因替換為偽狂犬病病毒AH02LA株的gC基因、gD基因替換為偽狂犬病病毒AH02LA株的gD基因后獲得的，所述偽狂犬病病毒AH02LA株的gC基因序列如SEQ ID No:1所示，所述偽狂犬病病毒AH02LA株的gD基因序列如SEQ ID No:2所示。

本發明還提供所述偽狂犬病病毒基因工程弱毒疫苗株在制備偽狂犬病疫苗中的應用。

本發明還提供以所述偽狂犬病病毒基因工程弱毒疫苗株為活性成分的疫苗。

在本發明中，偽狂犬病病毒基因工程弱毒疫苗株病毒液采用如下方法制備：將偽狂犬病病毒基因工程弱毒疫苗株接種ST細胞，采用含有胎牛血清的DMEM培養基培養36～48小時，收獲病毒培養物，凍融后離心取上清液作為偽狂犬病病毒基因工程弱毒疫苗株病毒液。

在本發明中，所述疫苗為活疫苗。疫苗內可以加入免疫佐劑與疫苗賦形劑等，本領域技術人員可以容易地進行生產。