[發明專利]一種環糊精葡萄糖基轉移酶的突變體及其應用

有效

• 申請號: 201811330680.8
• 申請日: 2018-11-09
• 公開（公告）號: CN109456950B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 吳敬;宿玲恰;杜立
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/12;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

1.一種環糊精葡萄糖基轉移酶的突變體，其特征在于，將來源于環狀芽孢桿菌(Bacillus circulans)的環糊精葡萄糖基轉移酶的第234位的氨基酸進行取代得到的突變體；所述來源于環狀芽孢桿菌(Bacillus circulans)的環糊精葡萄糖基轉移酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述突變體是將第234位置的甲硫氨酸(Met)變成異亮氨酸(Ile)，突變體命名為M234I；

或，所述突變體是將第234位置的甲硫氨酸(Met)變成丙氨酸(Ala)，突變體命名為M234A；

或，所述突變體是將第234位置的甲硫氨酸(Met)變成亮氨酸(Leu)，突變體命名為M234L；

或，所述突變體是將第234位置的甲硫氨酸(Met)變成纈氨酸(Val)，突變體命名為M234V。

2.編碼權利要求1所述環糊精葡萄糖基轉移酶的突變體的基因。

3.攜帶權利要求2所述環糊精葡萄糖基轉移酶的突變體的基因的載體或重組細胞。

4.制備權利要求1所述環糊精葡萄糖基轉移酶的突變體的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)根據確定的突變位點，設計定點突變的突變引物，以攜帶環糊精葡萄糖基轉移酶基因的載體為模板進行定點突變；構建含有編碼突變體的基因的質粒載體；

(2)將突變體質粒轉化進宿主細胞；

(3)挑選陽性克隆進行發酵培養，離心，收集發酵上清液即為突變體環糊精葡萄糖基轉移酶的粗酶液。

5.權利要求1所述環糊精葡萄糖基轉移酶的突變體在生產海藻糖中的應用。

6.權利要求2所述環糊精葡萄糖基轉移酶的突變體的基因在生產海藻糖中的應用。

7.權利要求3所述環糊精葡萄糖基轉移酶的突變體的基因的載體或重組細胞在生產海藻糖中的應用。

8.生產海藻糖的酶制劑，其特征在于，包括權利要求1所述環糊精葡萄糖基轉移酶的突變體。