[發明專利]補體C1抑制劑的檢測試劑盒制備方法

在審

• 申請號: 201811328531.8
• 申請日: 2018-11-09
• 公開（公告）號: CN111175508A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 方淑兵;楊蘇琦;馬曉暉
• 申請（專利權）人: 北京新華聯協和藥業有限責任公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N21/76
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種補體C1抑制劑(C1?INH)的檢測試劑盒制備方法，所述試劑盒包括：包被鏈霉親和素的載體、生物素標記的C1?INH反應物、C1?INH標準品、鼠抗人C1?INH抗體偶聯的辣根過氧化酶試劑、化學發光底物液A和B以及洗滌液。本發明提供的試劑盒及其應用，相比比色法靈敏度和特異性更高，臨床上，操作更簡單，且操作時間更短，能用于全自動或半自動發光免疫分析儀。

技術領域

本發明涉及檢測試劑盒領域，具體地說，涉及一種補體C1抑制劑的檢測試劑盒制備方法。

背景技術

補體C1抑制劑(C1 inhibitor，C1-INH)基因突變導致的C1-INH量的減少和(或)功能缺乏會導致遺傳性血管水腫(Hereditary angioedema，HAE)的發生。遺傳性血管水腫是一種以反復發作的皮下和(或)黏膜下水腫為主要表現的罕見遺傳性疾病。水腫為自發性或由某些因素誘發，具有局限性、非凹陷性、自限性的特點。常見受累部位包括顏面部、四肢、消化道及上呼吸道黏膜。遺傳性血管水腫是一種常染色體先行遺傳病，發病率1/10000～1/50000。

由于HAE發病率低，臨床上易發生誤診、誤治，從而導致較高的死亡率。該疾病的診斷除需要了解家族史和根據典型的臨床表現外，主要依賴于實驗室對C1-INH功能活性檢測。近年來，國外較多推薦采用比色法對C1-INH的功能進行檢測。但比色法的靈敏度和特異性較低，且操作較復雜，用時較長。

發明內容

為了解決現有技術中存在的問題，本發明的目的是提供一種補體C1抑制劑的檢測試劑盒制備方法。為了實現本發明目的，本發明首先提供一種補體C1抑制劑的檢測試劑盒，所述試劑盒包括：包被鏈霉親和素的載體、生物素標記的C1-INH反應物、C1-INH標準品、抗人C1-INH抗體偶聯的辣根過氧化酶試劑、化學發光底物液A和B以及洗滌液

進一步地，所述載體為化學發光板。

進一步地，所述抗人C1-INH抗體選自鼠抗人C1-INH單克隆抗體、兔抗人C1-INH多克隆抗體、羊抗人C1-INH的多克隆抗體、雞抗人C1-INH多克隆抗體中的一種或多種。作為優選，所述抗人C1-INH抗體選自鼠抗人C1-INH單克隆抗體。

本發明還提供了所述試劑盒的制備方法，包括以下步驟：

(1)包被鏈霉親和素的載體的制備：

包被鏈霉親和素的96孔化學發光板：將包被用包被鏈霉親和素加至碳酸鹽緩沖液中混勻，加入微孔板內，每孔100μL，包被濃度5～15μg/mL，4℃過夜孵育，用磷酸鹽緩沖液洗滌微孔板5遍后，再加入含有BSA的磷酸鹽緩沖液，37℃孵育2小時后，棄去孔內液體，37℃干燥2小時，于鋁箔袋真空包裝，放2-8℃保存；

(2)生物素標記的C1-INH反應物的制備：用0.1mol/L，pH8.0的碳酸氫鈉緩沖液或0.5mol/L，pH8.6的硼酸鹽緩沖液，對C1-INH反應物充分透析；然后將C1-INH反應物用0.1mol/L，pH8.0的碳酸氫鈉緩沖液或0.5mol/L，pH8.6的硼酸鹽緩沖液稀釋到1mg/mL備用；用0.2mLDMSO溶解1mg的NHSB；向1mL C1-INH反應物溶液加入150μl NHSB溶液；在室溫下持續攪拌2-4小時；加入9.6μL 1mol/L NH₄Cl，在室溫下攪拌10分鐘；在4℃，對PBS充分透析，以除去游離的生物素；將樣品過1mL的分子篩柱，以PBS緩慢洗脫，收集1mL/管；最后，樣品加入疊氮鈉及1.0g/LBSA.將結合產物置4℃，避光保存；

(3)鼠抗人C1-INH抗體偶聯的辣根過氧化酶試劑的制備：

a稱取5mg HRP溶解于1ml蒸餾水中，加入1ml新配的0.06M NaIO₄溶液，4℃避光孵育30分鐘。

b孵育結束后加入0.6mL的200mM乙二醇，室溫孵育30分鐘。