[發明專利]血漿中長鏈非編碼RNA MALAT1、HIF1A-AS1和XIST在非小細胞肺癌早期診斷試劑盒中的應用

在審

• 申請號: 201811328442.3
• 申請日: 2018-10-30
• 公開（公告）號: CN109234398A
• 公開（公告）日: 2019-01-18
• 發明（設計）人: 楊敏;劉俊;劉義
• 申請（專利權）人: 深圳瑞科生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 深圳市鼎智專利代理事務所(普通合伙) 44411
• 代理人: 徐永雷

本發明公開的血漿中長鏈非編碼RNA MALAT1、HIF1A?AS1和XIST在非小細胞肺癌早期診斷試劑盒中的應用，是通過實時熒光定量PCR檢測待測者血漿中MALAT1、HIF1A?AS1和XIST的相對表達量(GAPDH為內參)，用于非小細胞肺癌高危人群早期非小細胞肺癌篩查，具有靈敏度高、特異性強、操作簡單且成本低等優點。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，特別涉及血漿中長鏈非編碼RNA MALAT1、HIF1A-AS1和XIST在非小細胞肺癌早期診斷試劑盒中的應用。

背景技術

肺癌是全球范圍內發病率和死亡率最高的惡性腫瘤。我國2017年肺癌新發病數達到80萬，死亡人數近70萬，占所有癌癥死亡人數的四分之一，而這一數據還在以每年26.9％的速度增長，預計到2025年將達到100萬人。臨床上約85％的肺癌為非小細胞肺癌，5年生存率低于15％。由于早期診斷方法的限制，超過75％的患者錯過了手術治療的最佳時期，從而導致非小細胞肺癌死亡率高居不下。因此，除進一步采取措施控制煙草消費以及減少空氣污染外，使用準確、高效、快速可重復的診斷標志物或技術對非小細胞肺癌高危人群進行早期篩查將有利于患者及時接收治療、提高生存質量。

長鏈非編碼RNA(Long non-coding RNA，lncRNA)是一類轉錄本長度超過200nt、不編碼蛋白質的RNA。這些lncRNA曾一度被認為沒有生物學功能，只是轉錄過程中產生的“噪音”。但近年來，越來越多的研究表明lncRNA水平的異常與包括肺癌在內的許多腫瘤發生、發展有關。

肺癌轉移相關轉錄本1(Metastasis-associated lung adenocarcinomatranscript 1，MALAT1)最初是在對比肺癌轉移瘤和非小細胞肺癌轉移過程中發現的，并被認為與肺癌高度侵襲性和轉移特點及患者不良的預后密切相關。此外，在人體各器官組織中均有MALAT1的表達。多項研究證實MALAT1的差異表達可作為重要的腫瘤生物學標志。HIF1A-AS1在腎臟腫瘤及腹主動脈瘤中高表達，表明其參可能參與腫瘤的發生。其通過細胞凋亡蛋白之間的相互作用在細胞體外增殖和凋亡中發揮重要作用。X染色體失活特異轉錄因子lncRNA(X-inactive specific transcript，XIST)是XIST基因編碼產物，主要調節哺乳細胞X染色體失活。研究證實XIST在某些腫瘤中高表達，例如膠質母細胞瘤、乳腺癌和子宮癌，表明XIST可以作為生物標志物用于腫瘤性疾病的診斷。體內外實驗結果表明敲除XIST基因后能抑制腫瘤生長，提示XIST在惡性腫瘤的發生和發展中發揮重要作用。但由于使用單一lncRNA作為檢測指標存在特異性低、靈敏度差的缺陷，因此本發明同時對多個lncRNA進行聯合檢測成為提高特異性和靈敏度的關鍵。目前還未見MALAT1，HIF1A-AS1和XIST在非小細胞肺癌早期診斷中的研究及應用。

發明內容

本發明的主要目的是提供MALAT1、HIF1A-AS1和XIST基因在非小細胞肺癌早期診斷試劑盒中的應用，還在于提供一種非小細胞肺癌早期診斷試劑盒。

為實現上述目的，本發明提出的一種非小細胞肺癌早期診斷試劑盒，包括擴增及檢測長鏈非編碼RNA MALAT1、HIF1A-AS1、XIST和內參上下游引物。

優選地，還包括實時熒光定量PCR試劑、逆轉錄試劑，以及RNA提取試劑。

優選地，所述的內參為GAPDH基因。

優選地，所述的上下游引物包括：

MALAT1上游引物：5′-AAAGCAAGGTCTCCCCACAAG-3′，

MALAT1下游引物：5′-GGTCTGTGCTAGATCAAAAGGC-3′；

HIF1A-AS1上游引物：5′-TCTTCGGTACTTTACGCACCC-3′，