[發(fā)明專利]乙二胺四乙酸二鈉作為治療水母皮炎藥物的應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811324640.2
• 申請(qǐng)日: 2018-11-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109464434A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-03-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 于華華;李翱宇;李榮鋒;劉松;邢榮娥;陳曉琳;李鵬程
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院海洋研究所
• 主分類號(hào): A61K31/198
• 分類號(hào): A61K31/198;A61P29/00;A61P17/00
• 代理公司: 沈陽(yáng)科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 李穎

本發(fā)明涉及海洋生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種乙二胺四乙酸二鈉(非特異性金屬蛋白酶抑制劑)作為治療水母皮炎藥物的應(yīng)用。EDTA二鈉作為治療水母皮炎藥物的應(yīng)用。本發(fā)明采用乙二胺四乙酸二鈉可有效抑制水母毒素引起的兩種細(xì)胞(人角質(zhì)形成細(xì)胞HaCaT和人胚胎成纖維細(xì)胞CCC?ESF?1)的死亡和炎癥因子mRNA的表達(dá)量，進(jìn)而可將其作為用于制備水母皮炎的藥物，拓寬了EDTA二鈉的應(yīng)用范圍。

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及海洋生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種乙二胺四乙酸二鈉(非特異性金屬蛋白酶抑制劑)作為治療水母皮炎藥物的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

水母屬腔腸動(dòng)物門，有刺胞的海洋水生動(dòng)物，當(dāng)人觸及水母時(shí)，刺胞內(nèi)的毒素以極快的速度刺入皮膚導(dǎo)致蜇傷。我國(guó)主要的傷人水母有沙海蜇和霞水母。近年來(lái)，全球范圍的水母暴發(fā)不僅造成海洋生態(tài)系統(tǒng)紊亂，也給人類生產(chǎn)、生活帶來(lái)了嚴(yán)重的影響。水母蜇傷已經(jīng)成為最常見(jiàn)的海洋生物傷。據(jù)美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生院估計(jì)，全球每年約有1.5億人次被水母蜇傷，其中不乏死亡病例。水母蜇傷引起的紅腫紅斑、水泡以及刺癢、麻痛感等水母皮炎癥狀是主要癥狀，影響日常工作與生活，特別是睡眠。目前，國(guó)內(nèi)外沒(méi)有專治水母皮炎的藥物，大多沿用民間土法、驗(yàn)方或參考其它種類的皮炎來(lái)治療，效果差，甚至于加重病情。

水母毒素是水母蜇傷的物質(zhì)基礎(chǔ)，是發(fā)病的根本原因。水母毒素的主要活性成分為多肽和蛋白，具有溶血、酶活性、心臟毒性、神經(jīng)毒性、肌肉毒性、皮膚壞死作用等多種生物活性。轉(zhuǎn)錄組聯(lián)合蛋白組學(xué)對(duì)水母毒素成分解析發(fā)現(xiàn)，金屬蛋白酶是水母毒素的主要成分，傳統(tǒng)生化分析也驗(yàn)證了水母毒素具有金屬蛋白酶活性。蛇毒中的金屬蛋白酶成分在其咬傷導(dǎo)致的傷口疼痛、流血不止以及潰爛等中毒現(xiàn)象中起重要作用。因此，水母毒素中的金屬蛋白酶可能是導(dǎo)致水母皮炎的重要因素。所以,亟需根據(jù)水母毒素的生物活性研制治療水母皮炎的藥物。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的是提供一種EDTA二鈉(非特異性金屬蛋白酶抑制劑)作為制備水母皮炎藥物的應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用技術(shù)方案為

一種EDTA二鈉作為制備水母皮炎藥物的應(yīng)用。

所述式Ⅰ所示EDTA二鈉經(jīng)溶解稀釋后作為制備水母皮炎藥物的應(yīng)用；

所述式Ⅰ所示EDTA二鈉經(jīng)滅菌水溶解后，再用10mM磷酸鹽緩沖液(NaH₂PO₄-Na₂HPO₄，pH 7.4)稀釋。

EDTA二鈉抑制水母毒素對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞HaCaT和人胚胎成纖維細(xì)胞CCC-ESF-1死亡率的實(shí)驗(yàn)方法為：

將EDTA二鈉用滅菌水溶解后，再用10mM磷酸鹽緩沖液(NaH₂PO₄-Na₂HPO₄，pH 7.4))稀釋得到EDTA二鈉溶液。

然后向水母毒素中加入EDTA二鈉溶液混合，使混合液中EDTA二鈉與水母毒素(以蛋白計(jì))的質(zhì)量比等于或小于1.49:1，混勻，37℃下反應(yīng)30min后待用。

向鋪有1×10⁵個(gè)/mL細(xì)胞(細(xì)胞可為HaCaT或CCC-ESF-1)的96孔板中加入100μL的EDTA二鈉和水母毒素混合液，100μL的按體積比為1:1混合的水母毒素與細(xì)胞培養(yǎng)基混合液(對(duì)照)及100μL的細(xì)胞培養(yǎng)基(空白)，用MTT法測(cè)定細(xì)胞的存活率。

EDTA二鈉抑制水母毒素導(dǎo)致的人角質(zhì)形成細(xì)胞HaCaT和人胚胎成纖維細(xì)胞CCC-ESF-1炎癥因子mRNA表達(dá)量的實(shí)驗(yàn)方法為：