[發(fā)明專利]一種含羧基香豆素衍生物及其合成方法和應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811324486.9
• 申請日: 2018-11-08
• 公開（公告）號: CN109516969B
• 公開（公告）日: 2022-03-18
• 發(fā)明（設計）人: 陰彩霞;解茜茜;霍方俊
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: C07D311/16
• 分類號: C07D311/16;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 太原市科瑞達專利代理有限公司 14101
• 代理人: 劉寶賢

本發(fā)明公開了一種含羧基香豆素衍生物及其合成方法和應用，所述衍生物的中文名稱為(Z)?2?氰基?3?(4?((E)?3?(7?(4?(乙氧羰基)哌嗪?1?基)?2?氧代?2H?色烯?3?基)?3?氧代丙?1?烯?1?基)苯基)丙烯酸，英文名稱為(Z)?2?cyano?3?(4?((E)?3?(7?(4?(ethoxycarbonyl)piperazin?1?yl)?2?oxo?2H?chromen?3?yl)?3?oxoprop?1?en?1?yl)phenyl)acrylic acid，命名為XI?2。本發(fā)明提供了一種衍生物XI?2對半胱氨酸特異性檢測的方法，在PBS?DMSO(4:1,v/v，pH 7.4)的溶液中，通過熒光分光光度計定量檢測半胱氨酸的含量。該檢測過程可循環(huán)、簡便、靈敏、快速，檢測結果準確。本發(fā)明還提供了衍生物XI?2在制備細胞半胱氨酸檢測試劑中的應用，即XI?2在NEM調控作用下高效滲透細胞膜實現檢測細胞質中的半胱氨酸。

技術領域

本發(fā)明涉及香豆素衍生物，具體屬于一種含羧基香豆素衍生物及其合成方法和N-乙基馬來酰亞胺(NEM)調控作用下高效滲透細胞膜、區(qū)分檢測細胞膜上和細胞質中半胱氨酸的應用。

背景技術

半胱氨酸體內平衡的改變與多種疾病和細胞功能有關，因此，半胱氨酸動態(tài)實時活細胞胞內成像和定量分析對于理解病理、生理過程非常重要。因此，半胱氨酸探針是否具有高效滲透性是至關重要的。

研究表明，細胞膜由磷脂雙分子層和嵌入的蛋白質組成，蛋白質穿過細胞膜并吸附在細胞膜表面。膜蛋白中的整合膜蛋白在細胞質基質一側的半胱氨酸殘基上與脂肪分子共價結合，插入脂質雙層之間，少數蛋白與糖脂共價結合。N-乙基馬來酰亞胺(NEM)作為蛋白質半胱氨酸殘基的共價修飾基因，用于培養(yǎng)細胞后，與膜蛋白巰基進行反應，改變了細胞膜的原始結構，使細胞膜的通透性提高，探針能夠高效檢測細胞質中的半胱氨酸。

然而，目前還沒有關于高效檢測細胞質中半胱氨酸的特異性熒光探針的報道。這仍然是一個挑戰(zhàn)。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是提供一種含羧基香豆素衍生物及其制備方法，所述的含羧基香豆素衍生物選擇性好，靈敏度高，可實現定量循環(huán)檢測半胱氨酸以及在NEM調控下高效檢測細胞質中半胱氨酸。

本發(fā)明提供的一種含羧基香豆素衍生物，中文名稱為(Z)-2-氰基-3-(4-((E)-3-(7-(4-(乙氧羰基)哌嗪-1-基)-2-氧代-2H-色烯-3-基)-3-氧代丙-1-烯-1-基)苯基)丙烯酸，英文名稱是：

(Z)-2-cyano-3-(4-((E)-3-(7-(4-(ethoxycarbonyl)piperazin-1-yl)-2-oxo-2H-chromen-3-yl)-3-oxo prop-1-en-1-yl)phenyl)acrylic acid，命名為XI-2。結構式為：

本發(fā)明提供的一種含羧基香豆素衍生物XI-2的合成方法，包括如下步驟：

1)將氯甲酸乙酯和碳酸氫鈉溶解在四氫呋喃中，緩慢滴加到含間羥基苯基哌嗪的四氫呋喃和去離子水的混合溶液中，室溫過夜攪拌；萃取，干燥，減壓蒸餾得到白色針狀晶體化合物A：4-(3-羥基苯基)哌嗪-1-甲酸乙酯；其中氯甲酸乙酯、碳酸氫鈉和間羥基苯基哌嗪的摩爾比1.4-1.7:1.1-1.4:1；

2)在冰水浴條件下，將過量的三氯氧磷緩慢滴加到N,N-二甲基甲酰胺中，攪拌，將0℃溶解在N,N-二甲基甲酰胺中的化合物A加入到上述溶液中，攪拌；將體系倒入冰水中，調pH至析出大量白色固體，抽濾，得化合物B：4-(4-甲?；?3-羥基苯基)哌嗪-1-甲酸乙酯；

3)按摩爾比1:1.5-2.0將步驟2)所得化合物B和乙酰乙酸乙酯加入乙醇中，加入催化量的哌啶，回流至反應完全；冷卻至室溫，析出黃色針狀固體，抽濾得化合物C：4-(3-乙?；?2-氧代-2H-色烯-7-基)哌嗪-1-甲酸乙酯；