[發明專利]一種鑒定胃潰瘍生物標記物的方法及其檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201811324139.6
• 申請日: 2018-11-01
• 公開（公告）號: CN109212099A
• 公開（公告）日: 2019-01-15
• 發明（設計）人: 張麗娟;單鳴;徐紅梅;付靜
• 申請（專利權）人: 青島大學附屬醫院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種鑒定胃潰瘍的生物標記物的方法及其檢測試劑盒。所述生物標記物為血清中經過柱前1?苯基?5?甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色譜得到的游離葡萄糖、游離甘露糖和葡萄糖與甘露糖濃度的比值。本發明檢測方法為柱前PMP衍生的高效液相色譜法。本發明的技術方案具有前處理簡單，分析時間短，儀器價格合理，符合常規使用，操作步驟簡單易學，檢測結果準確性高，只需采血即可，并且所需血清量極少，采血量小于1mL等優點。所得結果顯示此分析方法可以快速定量胃潰瘍患者血清中游離的甘露糖和葡萄糖，對于研究血清游離甘露糖及葡萄糖與胃潰瘍之間的關系、尋找新型胃潰瘍臨床檢測標志物有著非常重要的意義。

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種鑒定胃潰瘍的生物標記物的方法及其檢測試劑盒。

背景技術

胃潰瘍是消化性潰瘍中瘍中最常見的一種，主要指胃黏膜被胃消化液自身消化造成的超過黏膜肌層的組織損傷，是發生于賁門與幽門之間的炎性壞死性病變。全球范圍內，胃潰瘍的發病率為5％～10％，且呈逐年上升趨勢。在我國進行胃鏡檢查的患者中，消化性潰瘍占15％～35％，而其癌變率和死亡率分別為1.5％、2.5％，慢性胃潰瘍并發癥發生率高，嚴重危害患者健康。目前胃潰瘍的診斷主要基于特定的癥狀以及內鏡檢查或鋇劑造影劑X光檢查的幫助下進行確診，血液檢查目前尚不能準確診斷消化性潰瘍。近年來，隨著生活節奏加快，社會、工作、心理負擔加重，以及非流體抗炎藥和低劑量阿司匹林的廣泛使用，胃潰瘍的發病率呈現明顯的上升趨勢。胃潰瘍的早期診斷對于病情的控制、預防并發癥以及防止發生癌變至關重要，亟需尋找更好的有助于胃潰瘍早期診斷、鑒別及預后判定的血清生物學標志物。

人體血清游離單糖中葡萄糖的含量最高，正常人的范圍為3.90～6.16mmol/L。目前，醫院檢驗科可以直接通過測生化指標檢測葡萄糖濃度，暫時不可以直接檢測甘露糖濃度。健康成人血漿中游離甘露糖的濃度范圍為20～80μmol/L。甘露糖的含量約為葡萄糖含量的1％。它大部分被認為是由細胞中的葡萄糖異構化而來。而近來有研究表明，細胞中流出的游離的甘露糖是哺乳動物血液中游離甘露糖的主要來源。這兩部分來源的游離甘露糖維持著血清中甘露糖的穩定。D-甘露糖是糖蛋白，細胞表面糖綴合物和糖基化磷脂酰肌醇錨定蛋白等結構中必需的單糖。其中，甘露糖是各種多糖復合物中N-糖鏈的重要組分，N-聚糖中的甘露糖殘基來源于血液中的葡萄糖或甘露糖。游離甘露糖是正常的血漿成分。目前，血清甘露糖的測定方法主要有酶法、氣液色譜法、高分辨液相層析、氣液色譜-質譜法和毛細管電泳法等。但這些方法均存在一定的不足之處。比如，使用酶法、氣液色譜法和高分辨液相層析時，為避免高濃度的葡萄糖的影響需要將其去除，致使前處理過程比較繁瑣；氣液色譜-質譜法儀器價格昂貴，不適合常規目的；所需血清樣本量大。目前沒有文獻報道柱前1-苯基-5-甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色譜法同時檢測胃潰瘍患者血清中游離的甘露糖和葡萄糖。

發明內容

本發明的目的是提供了用于鑒定胃潰瘍的生物標記物及其應用，本發明采用柱前PMP衍生的高效液相色譜法(HPLC)檢測胃潰瘍患者血清中的單糖，尤其涉及血清中游離甘露糖和葡萄糖的檢測。本發明的技術方案可以用于檢測胃潰瘍患者或正常人血清游離甘露糖和葡萄糖濃度，可以用于鑒定胃潰瘍患者。

為實現本發明的目的，本發明通過以下技術方案予以實現：

用于鑒定胃潰瘍的生物標記物，所述生物標記物為血清經過柱前PMP衍生的高效液相色譜得到的游離葡萄糖、游離甘露糖和葡萄糖與甘露糖濃度的比值(G/M濃度比)。

用于鑒定胃潰瘍的生物標記物的定量分析方法，其特征在于：該方法為柱前PMP衍生的高效液相色譜法，包括以下具體步驟：

(1)調節pH為7-14：取待檢測的血清樣品加超純水于EP管中，加入氫氧化鈉，渦旋混勻；

(2)PMP衍生：每個樣品加入PMP，渦旋混勻，離心后置于烘箱反應；

(3)加酸中和反應：將烘箱內的樣品取出，放置冷卻，每個樣品加入鹽酸，渦旋混勻；