[發明專利]一種鑒定卵巢癌生物標記物的方法及其檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201811323623.7
• 申請日: 2018-11-01
• 公開（公告）號: CN109406663A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 張麗娟;曾鵬嬌;李鵑;王沛濤
• 申請（專利權）人: 青島大學附屬醫院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種鑒定卵巢癌的生物標記物的方法及其檢測試劑盒。所述生物標記物為血清中經過柱前1?苯基?5?甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色譜得到的游離甘露糖和葡萄糖。本發明檢測方法為柱前PMP衍生的高效液相色譜法。本發明的技術方案具有前處理簡單，分析時間短，儀器價格合理，符合常規使用，操作步驟簡單易學，檢測結果準確性高，只需采血經高效液相色譜分析后便可區分正常人和卵巢癌患者，并且所需血清量極少，采血量小于1mL等優點。所得結果顯示此分析方法可以快速定量卵巢癌患者血清中游離的甘露糖和葡萄糖，對于研究血清游離甘露糖及葡萄糖與卵巢癌之間的關系、尋找新型卵巢癌臨床檢測標志物有著非常重要的意義。

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種鑒定卵巢癌的生物標記物的方法及其檢測試劑盒。

背景技術

卵巢癌是女性生殖器官常見的腫瘤之一，發病率僅次于子宮頸癌和子宮體癌而列居第三位。但因卵巢癌致死者，卻占各類婦科腫瘤的首位，對婦女生命造成嚴重威脅。卵巢癌的術前診斷檢查手段一般有超聲、腹腔鏡CT掃描，核磁共振成像，活檢等技術，但都不能給出診斷性的結果。腫瘤標志物測定中目前最常用的臨床檢測標記物CA125是卵巢上皮性癌的理想標記物，其陽性檢測率在漿液性癌可達70％～90％。卵巢黏液性囊腺癌患者50％左右血清中癌胚抗原(CEA)陽性。甲胎蛋白(AFP)在幾乎所有的內胚竇瘤明顯升高，在部分未成熟畸胎瘤、混有卵黃囊成分的其它生殖細胞腫瘤也有升高。這些診斷方法均會帶來一定的弊端。因此，尋找一種方便，無創傷的檢測方法是十分必要的。而最理想的就是不需活檢，且靈敏性和特異性高的血清分析。

人體血清游離單糖中葡萄糖的含量最高，正常人的范圍為3.90～6.16mmol/L。目前，醫院檢驗科可以直接通過測生化指標檢測葡萄糖濃度，暫時不可以直接檢測甘露糖濃度。健康成人血漿中游離甘露糖的濃度范圍為20～80μmol/L。甘露糖的含量約為葡萄糖含量的1％。它大部分被認為是由細胞中的葡萄糖異構化而來。而近來有研究表明，細胞中流出的游離的甘露糖是哺乳動物血液中游離甘露糖的主要來源。這兩部分來源的游離甘露糖維持著血清中甘露糖的穩定。D-甘露糖是糖蛋白，細胞表面糖綴合物和糖基化磷脂酰肌醇錨定蛋白等結構中必需的單糖。其中，甘露糖是各種多糖復合物中N-糖鏈的重要組分，N-聚糖中的甘露糖殘基來源于血液中的葡萄糖或甘露糖。游離甘露糖是正常的血漿成分。目前，血清甘露糖的測定方法主要有酶法、氣液色譜法、高分辨液相層析、氣液色譜-質譜法和毛細管電泳法等。但這些方法均存在一定的不足之處。比如，使用酶法、氣液色譜法和高分辨液相層析時，為避免高濃度的葡萄糖的影響需要將其去除，致使前處理過程比較繁瑣；氣液色譜-質譜法儀器價格昂貴，不適合常規目的；所需血清樣本量大。目前沒有文獻報道柱前1-苯基-5-甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色譜法同時檢測卵巢癌患者血清中游離的甘露糖和葡萄糖。

發明內容

本發明的目的是提供了用于鑒定卵巢癌的生物標記物及其應用，本發明采用柱前PMP衍生的高效液相色譜法(HPLC)檢測卵巢癌患者血清中的單糖，尤其涉及血清中游離甘露糖和葡萄糖的檢測。本發明的技術方案可以用于檢測卵巢癌患者或正常人血清游離甘露糖和葡萄糖濃度，可以用于鑒定卵巢癌患者。

為實現本發明的目的，本發明通過以下技術方案予以實現：

用于鑒定卵巢癌的生物標記物，所述生物標記物為血清經過柱前PMP衍生的高效液相色譜得到的游離甘露糖和葡萄糖。

用于鑒定卵巢癌的生物標記物的定量分析方法，其特征在于：該方法為柱前PMP衍生的高效液相色譜法，包括以下具體步驟：

(1)調節pH為7-14：取待檢測的血清樣品加超純水于EP管中，加入氫氧化鈉，渦旋混勻；

(2)PMP衍生：每個樣品加入PMP，渦旋混勻，離心后置于烘箱反應；

(3)加酸中和反應：將烘箱內的樣品取出，放置冷卻，每個樣品加入鹽酸，渦旋混勻；