[發(fā)明專利]一種用于PET塑料降解的基因工程菌

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201811321351.7
• 申請日: 2018-11-07
• 公開（公告）號: CN109402037A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 方崇洲;周光前;李明;蘇慶寧;韓倩;莫翠萍;周焱
• 申請（專利權(quán)）人: 深倫生物科技(深圳)有限公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12R1/19
• 代理公司: 深圳市君勝知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44268
• 代理人: 王永文;劉文求

1.一種用于PET塑料降解酶的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌包括同時在細(xì)胞外分泌表達(dá)PET水解酶和MHET水解酶的基因片段，所述表達(dá)PET水解酶基因片段為SEQ IDNO.1中的核苷酸序列，所述表達(dá)MHET水解酶的基因片段為SEQ ID NO.2中的核苷酸序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于PET塑料降解的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是通過采用雙質(zhì)粒雙表達(dá)方式或單質(zhì)粒雙表達(dá)方式中的一種將用于表達(dá)PET水解酶和MHET水解酶的基因片段轉(zhuǎn)入宿主菌得到的。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述用于PET塑料降解的基因工程菌，其特征在于，當(dāng)所述基因工程菌通過雙質(zhì)粒雙表達(dá)方式重組用于表達(dá)PET水解酶和MHET水解酶的基因片段時，其包括步驟：

將SEQ ID NO.1中的核苷酸序列與抗AMP的pET-22b（+）表達(dá)載體通過酶切位點NcoI和SalI連接得到重組表達(dá)載體pET22b-PETase；

將SEQ ID NO.2中的核苷酸序列與抗Kan的pET-28a(+)表達(dá)載體通過酶切位點XbaI和XhoI連接得到重組表達(dá)載體pET28a-MHETase；

將所述重組表達(dá)載體pET22b-PETase和重組表達(dá)載體pET28a-MHETase同時轉(zhuǎn)化至宿主菌中，得到所述用于PET塑料降解的基因工程菌。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述用于PET塑料降解的基因工程菌，其特征在于，當(dāng)所述基因工程菌通過單質(zhì)粒雙表達(dá)方式重組用于表達(dá)PET水解酶和MHET水解酶的基因片段時，其包括步驟：

將SEQ ID NO.1中的核苷酸序列與pETDuet-1表達(dá)載體通過酶切位點XbaI和SalI連接得到重組表達(dá)載體pETDuet1-PET1；

將SEQ ID NO.2中的核苷酸序列與所述重組表達(dá)載體pETDuet1-PET1通過酶切位點BglII和XhoI連接得到重組表達(dá)載體pETDuet1-PET1+MHET1；

將所述重組表達(dá)載體pETDuet1-PET1+MHET1轉(zhuǎn)化至宿主菌中，得到所述用于PET塑料降解的基因工程菌。

5.根據(jù)權(quán)利要求2-4任一所述用于PET塑料降解的基因工程菌，其特征在于，所述表達(dá)MHET水解酶的基因片段中還包括用于表達(dá)信號肽的序列，所述信號肽用于將MHET水解酶引導(dǎo)至細(xì)胞外，所述用于表達(dá)信號肽的序列為：

tctagaaataattttgtttaactttaagaaggagatatacatatgaaatacctgctgccgaccgctgctgctggtctgctgctcctcgctgcccagccggcgatggcc。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于PET塑料降解的基因工程菌，其特征在于，所述PET水解酶的氨基酸序列為SEQ ID NO.3中的氨基酸序列。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述用于PET塑料降解的基因工程菌，其特征在于，所述MHET水解酶的氨基酸序列為SEQ ID NO.4中的核苷酸序列。