[發明專利]與小麥抗菲利普孢囊線蟲主效QTL緊密連鎖的KASP分子標記及其應用

在審

• 申請號: 201811319722.8
• 申請日: 2018-11-07
• 公開（公告）號: CN109295252A
• 公開（公告）日: 2019-02-01
• 發明（設計）人: 李洪杰;崔磊;周陽;張宏軍;孫蕾;孫玉;李靜婷;邱丹;楊麗;劉宏偉
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院作物科學研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;馬鑫

1.與小麥抗菲利普孢囊線蟲(Heterodera filipjevi)主效QTL緊密連鎖的KASP分子標記，其特征在于，所述的QTL命名為QCre-ma7D，位于小麥7D染色體上標記BS00150072～7D-165區間內；

所述的KASP分子標記包括KASP_BS00150072、KASP_BS00021745和KASP_BS00154302，所述的KASP分子標記分別通過以下特異性引物擴增得到：

用于擴增KASP_BS00150072分子標記的特異性引物：

正向引物F1：5′-ggaagctagtgtacaagaatgttct-3′

正向引物F2：5′-ggaagctagtgtacaagaatgttcc-3′

反向引物R1：5′-gcatcggtcatctcaacttcttc-3′

用于擴增KASP_BS00021745分子標記的特異性引物：

正向引物F3：5′-agtcaaacctcgcaaacgt-3′

正向引物F4：5′-agtcaaacctcgcaaacgc-3′

反向引物R2：5′-catgagcagcaatgccgac-3′

用于擴增KASP_BS00154302分子標記的特異性引物：

正向引物F5：5′-gtagggtttgactatcgccta-3′

正向引物F6：5′-gtagggtttgactatcgcctg-3′

反向引物R3：5′-gtcatctttgttcttcaagtagtcg-3′。

2.用于擴增權利要求1所述的KASP分子標記的特異性引物，其特征在于，用于擴增KASP_BS00150072分子標記的特異性引物為：

正向引物F1：5′-ggaagctagtgtacaagaatgttct-3′

正向引物F2：5′-ggaagctagtgtacaagaatgttcc-3′

反向引物R1：5′-gcatcggtcatctcaacttcttc-3′。

3.用于擴增權利要求1所述的KASP分子標記的特異性引物，其特征在于，用于擴增KASP_BS00021745分子標記的特異性引物為：

正向引物F3：5′-agtcaaacctcgcaaacgt-3′

正向引物F4：5′-agtcaaacctcgcaaacgc-3′

反向引物R2：5′-catgagcagcaatgccgac-3′。

4.用于擴增權利要求1所述的KASP分子標記的特異性引物，其特征在于，用于擴增KASP_BS00154302分子標記的特異性引物為：

正向引物F5：5′-gtagggtttgactatcgccta-3′

正向引物F6：5′-gtagggtttgactatcgcctg-3′

反向引物R3：5′-gtcatctttgttcttcaagtagtcg-3′。

5.一種利用權利要求1所述的KASP分子標記鑒定抗菲利普孢囊線蟲小麥品種的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)提取待測小麥的基因組DNA；

2)以待測小麥的基因組DNA為模版，利用權利要求2-4任一項所述的特異性引物分別進行PCR擴增反應；

3)檢測PCR產物，判定待測小麥品種是否攜帶Qcre-ma7D

若三個KASP分子標記KASP_BS00150072、KASP_BS00021745和KASP_BS00154302檢測得到的基因型分別為TT、GG和AA，則判定該小麥品種為攜帶QCre-ma7D的小麥品種，即為抗菲利普孢囊線蟲的小麥品種。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟2)中PCR擴增反應使用的擴增體系以5μL計，包括：10～20ng/μL基因組DNA 2.2μL，2.5μL 1×KASP master mixture和0.056μL混合引物。