[發(fā)明專利]一種適用于外源基因轉(zhuǎn)染的納米載體材料及其制備方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201811318288.1 | 申請(qǐng)日： | 2018-11-07 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN109402177A | 公開(kāi)（公告）日： | 2019-03-01 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 李威;梁蓓蓓;黃勇;黃鋼;孟繼鴻;董霞 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 上海健康醫(yī)學(xué)院 |
| 主分類號(hào)： | C12N15/87 | 分類號(hào)： | C12N15/87;C12N15/79;C12N15/85 |
| 代理公司： | 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245 | 代理人： | 陸惠中;王永偉 |
| 地址： | 201318 上*** | 國(guó)省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 轉(zhuǎn)染 制備 納米材料 外源基因 轉(zhuǎn)染效率 倒置熒光顯微鏡 納米載體材料 應(yīng)用前景廣闊 流式細(xì)胞儀 生物安全性 細(xì)胞 病毒載體 電泳檢測(cè) 高效轉(zhuǎn)染 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 血清條件 陽(yáng)離子型 真核細(xì)胞 自組裝法 陽(yáng)離子 交聯(lián) 可用 載質(zhì) 檢測(cè) 替代 | ||
1.一種納米轉(zhuǎn)染載體，其特征在于，所述納米轉(zhuǎn)染載體包含陽(yáng)離子高分子材料和交聯(lián)劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米轉(zhuǎn)染載體，其特征在于，所述納米轉(zhuǎn)染載體以所述陽(yáng)離子高分子材料作為底物，經(jīng)分子交聯(lián)及納米自組裝獲得。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的納米轉(zhuǎn)染載體，其特征在于，所述陽(yáng)離子高分子材料是脂質(zhì)體、樹(shù)枝狀聚合物、陽(yáng)離子聚合物，優(yōu)選聚賴氨酸、線性和分枝聚乙烯亞胺、聚酰胺基胺。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的納米轉(zhuǎn)染載體，其特征在于，所述交聯(lián)劑為3,3'-二硫代二丙酸二(N-羥基丁二酰亞胺)酯。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的納米轉(zhuǎn)染載體，其特征在于，所述陽(yáng)離子高分子材料和所述交聯(lián)劑的摩爾比為1:0.1-1:100。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的納米轉(zhuǎn)染載體，其特征在于，所述陽(yáng)離子高分子材料和所述交聯(lián)劑的摩爾比為1:1。
7.一種轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA的方法，其特征在于，所述方法利用根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的納米轉(zhuǎn)染載體轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA。
8.一種制備如權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的納米轉(zhuǎn)染載體的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
A、通過(guò)分子交聯(lián)法制備納米轉(zhuǎn)染載體前體；
B、利用納米自組裝法制備納米轉(zhuǎn)染載體。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的納米轉(zhuǎn)染載體的制備方法，其特征在于，所述的步驟A為：取所述陽(yáng)離子高分子材料于水浴中攪拌；通氮?dú)猓渭铀鼋宦?lián)劑，繼續(xù)攪拌。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的納米轉(zhuǎn)染載體的制備方法，其特征在于，所述步驟B中，所述透析袋的分子量為1KD、3KD、5KD、10KD、25KD或75KD，優(yōu)選25KD。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的納米轉(zhuǎn)染載體的制備方法，其特征在于，在所述步驟A之前，對(duì)交聯(lián)前的體系：聚合高分子溶液、去離子水、DMSO進(jìn)行超聲處理10-30分鐘，功率范圍75-150KW。
12.根據(jù)權(quán)利要求9所述的納米轉(zhuǎn)染載體前體的制備方法，其特征在于，所述步驟A中，陽(yáng)離子高分子材料的使用濃度范圍為0.1-100g/L，優(yōu)選50mg/mL。
13.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的納米轉(zhuǎn)染載體或權(quán)利要求7或8所述的制備納米轉(zhuǎn)染載體的方法，其特征在于該載體對(duì)質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染具有溫度敏感性，且轉(zhuǎn)染效率隨溫度升高明顯提高達(dá)2左右。
14.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的納米轉(zhuǎn)染載體或權(quán)利要求7或8所述的制備納米轉(zhuǎn)染載體的方法，其特征在于該載體對(duì)質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)染具有血清穩(wěn)定性，能夠在有血清或者蛋白的溶液中轉(zhuǎn)染，且轉(zhuǎn)染效率不變。
15.根據(jù)權(quán)利要求10所述的納米轉(zhuǎn)染載體的制備方法，其特征在于，所述步驟B中，透析次數(shù)為2-3次，每6小時(shí)、8小時(shí)或12小時(shí)更換一次去離子水。
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