[發明專利]一種環境雌激素對家蠶發育毒性測試方法

有效

• 申請號: 201811317823.1
• 申請日: 2018-11-07
• 公開（公告）號: CN109557319B
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發明（設計）人: 袁紅霞;秦粉菊
• 申請（專利權）人: 蘇州科技大學
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

1.一種環境雌激素對家蠶發育毒性測試方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）配制壬基酚母液，并將其置于4℃冰箱避光保存備用；

（2）將壬基酚母液用稀釋液稀釋成三組不同的濃度：0.02、0.20、2.0 g/L，置于4℃冰箱避光保存；

（3）將實驗分為四組，包括步驟（2）所述的三種壬基酚濃度的染毒組和空白對照組，每組又設制3個重復組，每組設制15頭家蠶，將家蠶饑餓處理2h后，用100 μL平頭微量注射器吸取每組溶劑，針頭探入蠶口腔注射給藥100 μL；20 min后，在超凈工作臺上進行處理，解剖取中腸，中腸置于冰冷的生理鹽水中清洗后裝EP管，-20℃保存；

（4）將步驟（3）已取好的中腸組織塊制備中腸組織勻漿；

（5）將步驟（4）制得的中腸組織勻漿4℃離心，取上清液后分別測定谷胱甘肽還原酶活性系數以及抗超氧陰離子活力；

（6）數據處理：將實驗數據采用SPSS16.0 for Windows軟件對染毒組與對照組中腸組織的谷胱甘肽還原酶活性系數和抗超氧陰離子活力進行顯著性分析。

2.根據權利要求1所述的一種環境雌激素對家蠶發育毒性測試方法，其特征在于，所述步驟（1）中配制壬基酚母液的具體方法為：首先稱取1176 mg的壬基酚溶于50 mL的無水乙醇中，配制成20 g/L的壬基酚溶液，將此溶液用0.22 μm微孔濾膜過濾后，作為壬基酚母液轉入試劑瓶用膜封口后置于4℃冰箱避光保存。

3.根據權利要求1所述的一種環境雌激素對家蠶發育毒性測試方法，其特征在于，所述步驟（2）中的稀釋液為超純水和無水乙醇的混合溶液，經稀釋后的每組壬基酚溶液中的無水乙醇的體積分數均為10%。

4.根據權利要求1所述的一種環境雌激素對家蠶發育毒性測試方法，其特征在于，所述步驟（4）中制備中腸組織勻漿的具體步驟為：將已取好的中腸組織塊在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去其中的血液和絲腺雜質，濾紙拭干；準確稱取中腸組織塊重量，放入事先滅好菌并冷藏的研缽中，加入液氮研磨，研磨充分后加入中腸組織塊重量9倍的預冷0.9%生理鹽水制成10倍中腸組織勻漿。

5.根據權利要求1所述的一種環境雌激素對家蠶發育毒性測試方法，其特征在于，所述步驟（5）中的離心轉速為3500 r/min，離心時間為10 min。

6.根據權利要求1-5任一項所述的一種環境雌激素對家蠶發育毒性測試方法，其特征在于，所述的壬基酚為4-壬基酚。