[發(fā)明專利]干細(xì)胞體外擴增培養(yǎng)體系及其方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811317448.0
• 申請日: 2018-11-03
• 公開（公告）號: CN109370988A
• 公開（公告）日: 2019-02-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 章毅;伍婷;陳侃俊;李冉;陳亮;陸薇
• 申請（專利權(quán)）人: 章毅;中國干細(xì)胞集團上海生物科技有限公司;重慶市干細(xì)胞技術(shù)有限公司;中國干細(xì)胞集團海南博鰲附屬干細(xì)胞醫(yī)院有限公司;上海市干細(xì)胞技術(shù)有限公司;陜西省干細(xì)胞技術(shù)有限公司;蘇州市干細(xì)胞技術(shù)有限公司;三亞市干細(xì)胞技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N5/0789
• 分類號: C12N5/0789
• 代理公司: 上海市海華永泰律師事務(wù)所 31302
• 代理人: 包文超

1.一種干細(xì)胞體外擴增培養(yǎng)方法，其特征在于，培養(yǎng)過程中使干細(xì)胞與能抑制CD38表達(dá)和/或活性及CD38相關(guān)信號通路的表達(dá)和/或活性的物質(zhì)相接觸，延長細(xì)胞增殖周期，擴增CD34+細(xì)胞數(shù)量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述能抑制CD38表達(dá)和/或活性及CD38相關(guān)信號通路的表達(dá)和/或活性的物質(zhì)為煙酰胺類物質(zhì)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述煙酰胺類物質(zhì)是指能發(fā)揮類似煙酰胺作用的物質(zhì)，選自于煙酰胺、煙酰胺類似物、煙酰胺及其類似物的衍生物、煙酰胺及其類似物的代謝產(chǎn)物。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：

所述煙酰胺類似物選自于苯甲酰胺、尼古丁硫代酰胺、煙酸和α-氨基-3-吲哚丙酸之一種或幾種；

所述煙酰胺及其類似物的衍生物選自于取代苯甲酰胺、取代煙酰胺、N-取代煙酰胺、煙堿硫代酰胺之一種或幾種；

所述煙酰胺及其類似物的代謝產(chǎn)物為NAD、NADH和NADPH之一種或幾種。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述煙酰胺類物質(zhì)選自于煙酰胺、選自于苯甲酰胺、尼古丁硫代酰胺、煙酸或α-氨基-3-吲哚丙酮酸之一種或幾種。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述煙酰胺類物質(zhì)在培養(yǎng)體系中的終濃度為0.1mM～20mM。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述煙酰胺類物質(zhì)在培養(yǎng)體系中的終濃度為1.0mM～10mM。

8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述煙酰胺類物質(zhì)在培養(yǎng)體系中的終濃度為1.0mM～6.0mM。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，以無血清培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，還添加了8v/v％～12v/v％胎牛血清。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述培養(yǎng)體系中還外源性添加多種細(xì)胞因子，包括：

早期效應(yīng)細(xì)胞因子，其選自于肝細(xì)胞生長因子、FMS樣的酪氨酸激酶3配體、白介素-1、白介素-2、白介素-3、白介素-6、白介素-10、白介素-12、腫瘤壞死因子-α和促血小板生成素之一種或幾種；和

晚期效應(yīng)細(xì)胞因子，其選自于粒細(xì)胞集落刺激因子、巨噬細(xì)胞集落刺激因子、紅細(xì)胞生成素、纖維母細(xì)胞生長因子、表皮生長因子、神經(jīng)生長因子、血管內(nèi)皮生長因子、白血病抑制因子和肝細(xì)胞因子。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述外源添加的多種細(xì)胞因子為SCF30ng/mL～300ng/mL、TPO 2ng/mL～20ng/mL、FLt3配體50ng/mL～300ng/mL、IL-610ng/mL～100ng/mL和IL-3 20ng/mL～200ng/mL。

12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的體外擴增干細(xì)胞的培養(yǎng)體系，其特征在于，還添加G-CSF20ng/mL～80ng/mL，EPO 2ng/mL～20ng/mL。

13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述干細(xì)胞可來自于健康供體的新鮮的人骨髓血、動員的外周血或臍帶血，或來自于深低溫凍存的人臍帶血。

14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述干細(xì)胞為含造血干細(xì)胞的細(xì)胞群，其中20％～100％是CD34+細(xì)胞。

15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，將干細(xì)胞持續(xù)培養(yǎng)1周～12周。

16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，將干細(xì)胞持續(xù)培養(yǎng)3周～9周。