[發明專利]嵌合抗原受體DAP12-T2A-CD8α-MSLN scFv-TREM1及其用途

在審

• 申請號: 201811317136.X
• 申請日: 2018-11-07
• 公開（公告）號: CN109517070A
• 公開（公告）日: 2019-03-26
• 發明（設計）人: 王恩秀;汪晨;武國英
• 申請（專利權）人: 南京卡提醫學科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 談杰

1.一種嵌合抗原受體DAP12-T2A-CD8α-MSLN scFv-TREM1，其特征在于，所述嵌合抗原受體由胞內第二傳導結構域DAP12、T2A、CD8α信號肽、抗人MSLN單克隆抗體ss1輕鏈和重鏈可變區MSLN scFv、胞內第一傳導結構域TREM1串聯構成。

2.根據權利要求1所述的嵌合抗原受體DAP12-T2A-CD8α-MSLN scFv-TREM1，其特征在于，所述嵌合抗原受體含有針對人MSLN抗原的單鏈抗體MSLN scFv，其核酸序列如SEQ IDNO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，或與其具有85％-99％同一性的氨基酸序列；所述單鏈抗體的輕鏈可變區(VL)和重鏈可變區(VH)之間由連接肽(Linker)連接，包含GSLinker如(G₃S)₄或(G₄S)₃等，優選GGGGSGGGGSSGGGS連接肽。

3.根據權利要求1所述的嵌合抗原受體DAP12-T2A-CD8α-MSLN scFv-TREM1，其特征在于，第二傳導結構域DAP12通過T2A與胞外信號肽和抗原結合結構域串聯；優選的，所述DAP12核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，或與其氨基酸序列具有85％-99％同一性的多肽；所述T2A核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，氨基酸序列如SEQID NO.6所示，或與其氨基酸序列具有85％-99％同一性的多肽。

4.根據權利要求1所述的嵌合抗原受體DAP12-T2A-CD8α-MSLN scFv-TREM1，其特征在于，胞外信號肽選自核苷酸如SEQ ID NO.7所示的CD8α信號肽，氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示，或與其氨基酸序列具有85％-99％同一性的多肽；胞內第一傳導結構域選自核苷酸如SEQ ID NO.9所示的TREM1，TREM1氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示，或與其氨基酸序列具有85％-99％同一性的多肽。

5.一種編碼如權利要求1-4中任一項所述的靶向MSLN嵌合抗原受體的核酸。其特征在于，所述嵌合抗原受體的核酸序列如SEQ ID NO.16所示；所述嵌合抗原受體的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.20所示，或與其具有85％-99％同一性的氨基酸序列。

6.一種重組表達載體，其特征在于包含權利要求5所述的核酸分子。

7.一種制備權利要求1所述的嵌合抗原受體修飾的T細胞的方法，其特征在于該方法包括分離和激活待修飾的T細胞，然后以權利要求6所述的重組表達載體轉導該T細胞。

8.一種如權利要求6所述的重組表達載體的嵌合抗原受體的細胞；其特征在于所述的細胞選自免疫細胞；所述的細胞選自T淋巴細胞、NK細胞、NKT細胞、巨噬細胞、間充質干細胞、造血干細胞、多能干細胞或胚胎干細胞培養分化的免疫細胞。

9.一種藥物組合物，其特征在于包含有效量的權利要求8中任一項所述的細胞和藥學上可接受的載體。

10.權利要求1-4中任一項所述的靶向MSLN嵌合抗原受體，權利要求5中任一項所述的核酸，權利要求6所述的重組表達載體以及權利要求8所述的宿主細胞在制備哺乳動物腫瘤治療藥物中的應用；優選在制備惡性實體腫瘤治療藥物中的應用。