[發明專利]一種用于肝臟類器官培養的全小分子培養基及其用途

有效

• 申請號: 201811316386.1
• 申請日: 2018-11-07
• 公開（公告）號: CN109517783B
• 公開（公告）日: 2022-12-16
• 發明（設計）人: 林鑫華;趙冰;王鑫
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 張磊

本發明公開了一種用于肝臟類器官培養的全小分子培養基及其用途，所述培養基包含基礎培養基和小分子的組合，所維持的小分子的組合為CBF。其中C為CHIR?99021,B為Blebbistatin，C為Forskolin。本發明在基礎培養基中添加小分子CHIR，Blebbistatin，Forskolin，從而取代添加生長因子，在體外能夠長期培養肝臟膽管的類器官，并可進一步誘導分化形成肝實質細胞。本方法有利于肝臟類器官在體外的大量擴增，并為肝臟相關疾病的研究及治療提供基礎。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體地，本發明涉及一種用于肝臟類器官培養的全小分子培養基，更具體地，本發明涉及培養基、CHIR-99021、blebbistatin 以及 forskolin在制備培養基中的用途、培養肝臟類器官的方法。

背景技術

肝臟是機體的重要代謝器官，肝臟受損后會快速啟動修復再生，而它的修復再生主要是由肝臟膽管細胞驅動的。近幾年肝臟膽管的體外培養系統的推動了對肝臟領域的研究，在體外直接對肝臟膽管進行有效的實驗和觀察。體外培養的肝臟類器官可移植至受損肝臟并修復受損肝臟，除此之外體外培養的肝臟類器官還用于對病人個體的個性化藥物篩選，肝臟的類器官培養在藥物篩選和再生醫學領域有巨大的應用價值。

在進行小鼠肝臟類器官培養時，使用的培養條件為：基礎培養基Advanced DMEM/F12、血清替代物N2和B27、雙抗、2mM的GlutaMAX、1mM的N-acetylcysteine和10mM的Nicotinamide,以及培養所需的生長因子：50ng/mL的EGF、25ng/mL的Noggin、500ng/mL的R-spondin 1、100ng/mL的FGF10、50ng/mL的HGF以及10nM的[Leu15]-Gastrin I。進行人的肝臟類器官養時需要在小鼠肝臟類器官培養基的基礎上加入10uM 的forskolin，5uM的A83-01。

目前肝臟類器官培養需要加入EGF、Noggin、R-spondin、FGF10、HGF和[Leu15]-Gastrin I等生長因子，這些生長因子價格昂貴，不利于肝臟類器官培養系統的應用，極大的限制的肝臟類器官在體外的大量擴增，用于肝臟醫學領域的治療。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于肝臟類器官培養的全小分子培養基及其用途。

本發明提出的一種用于肝臟類器官培養的全小分子培養基，包括：基礎培養基、血清替代物、雙抗、谷氨酸鹽/酯、N-乙酰半胱氨酸、Nicotinamide、CHIR-99021、blebbistatin和forskolin，其中：所述CHIR-99021的濃度為3μM，所述Blebbistatin的濃度為10μM，所述forskolin的濃度為10μM。

本發明中，所述全小分子培養基還包括SUN11602、FH1和A83-01。

本發明中，所述基礎培養基為Advanced DMEM/F12，所述血清替代物為N2或B27中一種或兩種，所述雙抗為青霉素或鏈霉素中任一種或兩種，所述谷氨酸鹽/酯的濃度為2mM，所述N-乙酰半胱氨酸的濃度為1mM，所述Nicotinamide的濃度為10mM。

本發明中，所述SUN11602的濃度為10μM，所述FH1的濃度為10μM，所述A83-01的濃度為0.5μM。

本發明提出的一種的用于肝臟類器官培養的全小分子培養基的用途，所述全小分子培養基用于下列的至少之一：

（１）培養肝臟類器官，其中：所述肝臟類器官為肝臟膽管細胞；

（２）促進肝臟類器官增殖和/或分化，其中：所述小鼠腸隱窩或人腸肝臟膽管中任一種。

本發明中，將包裹在基質膠中的腸隱窩在權利要求１-４任一項所述全小分子培養基中進行培養，所述肝臟類器官為肝臟膽管細胞。