[發明專利]一種用于酸菜腌制的直投式復合乳酸菌發酵劑的制備方法

有效

• 申請號: 201811314586.3
• 申請日: 2018-11-06
• 公開（公告）號: CN109393440B
• 公開（公告）日: 2022-04-15
• 發明（設計）人: 葉海青;王鑫宇;張鐵華;柳慧琴
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23L29/00;A23L19/20;C12R1/25;C12R1/23;C12R1/225
• 代理公司: 北京君泊知識產權代理有限公司 11496
• 代理人: 王程遠

1.一種用于酸菜腌制的直投式復合乳酸菌發酵劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：分別將植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌及鼠李糖乳桿菌分別擴大培養，離心棄掉上清，菌泥加入保護劑經真空冷凍干燥制得粉末，按照一定比例混合均勻，即可用于酸菜發酵；

所述的保護劑的配方為：以加入到菌泥后的重量百分比計：10%~15%脫脂乳，2~5%海藻糖，0.5~2%麥芽糊精，0.8%~1.2%甘油；

所述的復合乳酸菌發酵劑中，植物乳桿菌：嗜酸乳桿菌：鼠李糖乳桿菌的比例為1~1.2:1:0.8~1；

所述的植物乳桿菌為發明人培育的一株植物乳桿菌lactobacillus plantarum；該株植物乳桿菌已經保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCCNo.16478，保藏日期：2018年9月17日。

2.如權利要求1所述的用于酸菜腌制的直投式復合乳酸菌發酵劑的制備方法，其特征在于，包括以下具體步驟：

A、發酵菌株的選擇及培養基的制備

本發明所述復合乳酸菌發酵劑所選菌種為：植物乳桿菌，嗜酸乳桿菌，鼠李糖乳桿菌；

選用MRS液體培養基：蛋白胨8~15g，酵母膏3~8g，檸檬酸二銨1~3g，牛肉膏8~12g，葡萄糖15~25g，吐溫80 0.5~2mL，乙酸鈉3~6g，磷酸氫二鉀1~3g，硫酸鎂0.1~0.3g，硫酸錳0.03~0.08g，溶于1000mL蒸餾水，固體培養基則另加12~18g瓊脂粉，120~125℃滅菌15~25分鐘；

B、用于酸菜腌制的直投式復合乳酸菌發酵劑的制備

B.1 菌種的活化

將三種乳酸菌菌粉分別于35~38℃水浴中復水8~12min，接種到MRS液體培養基中，35~38℃厭氧培養18~30h，接種到MRS固體平板上，35~38℃培養2~3天，用接種環挑取單菌落于MRS液體培養基中，35~38℃厭氧培養18~22h，以1.2~1.8%的接種量接種于MRS液體培養基中，重復轉接兩次即完成活化；

B.2 菌種的擴大培養

將活化好的菌種以1.2~1.8%的接種量接種于40mL MRS液體培養基中，35~38℃厭氧培養18~22h，繼續以1.2~1.8%的接種量接種于400mL MRS液體培養基中，35~38℃厭氧培養18~22h，檢測乳酸菌數量≥10⁹個/mL，若未達到數量要求則需繼續培養；

B.3 菌種凍干粉末的制備

收集三種乳酸菌發酵液，4℃條件下5000~7000r/min離心8~12分鐘，棄上清，收集菌體沉淀，用凍干保護劑洗脫沉淀，保護劑：沉淀=2~3:1；收集保護劑和菌泥混合物，鋪到平板中，厚度在1.5~2cm，-85~-75℃冷凍過夜，用真空冷凍干燥機進行真空冷凍干燥，冷凍溫度-55~-45℃，真空度1Pa，冷凍干燥18~30h，得到乳酸菌粉末；

B.4直投式發酵劑的復配

將三種乳酸菌粉末按照重量稱取，按照比例分別稱取三種乳酸菌粉末，并混合均勻，得到復合乳酸菌發酵劑。

3.如權利要求1-2任一所述的用于酸菜腌制的直投式復合乳酸菌發酵劑的使用方法，其特征在于，復合乳酸菌發酵劑的使用方法，包括以下具體步驟：

挑選新鮮、完整、無腐爛變質的白菜8~12kg，晾曬兩天除去水分，去除外層葉片，去除根部，清洗整理碼入壇中，壓實，將自來水煮沸冷卻，配制質量分數為1~3%的食鹽水10kg，稱取1~3g復合乳酸菌發酵劑，倒入鹽水中，充分混勻，將鹽水注入壇中，沒過白菜15cm為宜，密封壇口，壇口周圍水封以隔絕氧氣，于20~23℃下發酵22~25天。

4.如權利要求3所述的用于酸菜腌制的直投式復合乳酸菌發酵劑的使用方法，其特征在于，加入的復合乳酸菌發酵劑的用量為白菜重量的0.01~0.03%。