[發明專利]果蠅生殖系統中高效的轉錄激活系統

有效

• 申請號: 201811312144.5
• 申請日: 2018-11-06
• 公開（公告）號: CN109517840B
• 公開（公告）日: 2021-01-01
• 發明（設計）人: 朱麗霏;倪建泉;徐榮剛;毛德才;孫錦;賈豫
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/113;C12N15/90;A01K67/033
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 張潤

1.一種轉錄激活系統，其特征在于，所述轉錄激活系統包括dCas9蛋白表達元件和sgRNA表達元件，

所述dCas9蛋白表達元件上含有p-轉座酶啟動子、dCas9蛋白編碼序列、MCP蛋白編碼序列和轉錄激活因子編碼序列，所述轉錄激活因子編碼序列位于所述dCas9蛋白編碼序列的下游，所述MCP蛋白編碼序列位于所述dCas9蛋白編碼序列的下游；

所述sgRNA表達元件上含有U6B啟動子、sgRNA插入位點和MCP蛋白識別序列；

其中所述轉錄激活因子編碼序列包括VP64編碼序列、P65編碼序列和HSF1編碼序列，所述VP64編碼序列位于所述MCP蛋白編碼序列的上游，所述VP64編碼序列和所述MCP蛋白編碼序列之間含有自剪切肽T2A編碼序列，所述MCP蛋白編碼序列的下游依次為所述P65編碼序列和所述HSF1編碼序列；

所述轉錄激活系統用于果蠅生殖系統中基因的轉錄激活。

2.根據權利要求1所述的轉錄激活系統，其特征在于，所述VP64編碼序列為SEQ ID NO:21，所述P65的編碼序列為SEQ ID NO:26，所述HSF1編碼序列為SEQ ID NO:27，所述自剪切肽T2A的編碼序列為SEQ ID NO:23。

3.根據權利要求2所述的轉錄激活系統，其特征在于，用于擴增所述P65編碼序列的引物序列為SEQ ID NO:24和SEQ ID NO:25。

4.根據權利要求2所述的轉錄激活系統，其特征在于，用于擴增所述HSF1編碼序列的引物序列為SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28。

5.根據權利要求1所述的轉錄激活系統，其特征在于，所述dCas9蛋白表達元件和所述sgRNA表達元件通過質粒載體連接。

6.根據權利要求5所述的轉錄激活系統，其特征在于，所述質粒載體為pNP質粒。

7.根據權利要求5所述的轉錄激活系統，其特征在于，所述MCP蛋白編碼序列為SEQ IDNO:22。

8.根據權利要求5所述的轉錄激活系統，其特征在于，所述MCP蛋白識別序列為MS2序列。

9.根據權利要求1所述的轉錄激活系統，其特征在于，進一步包括：

至少兩個gypsy基因，所述gypsy基因分別位于所述dCas9蛋白表達元件和所述sgRNA表達元件的上游，

ftz內含子序列，所述ftz內含子序列位于所述dCas9蛋白表達元件的下游；

K10 polyA序列，所述K10 poly A序列位于所述dCas9蛋白表達元件的下游。

10.根據權利要求9所述的轉錄激活系統，其特征在于，所述gypsy基因序列為SEQ IDNO:5；所述ftz內含子序列為SEQ ID NO:6；所述K10 polyA序列為SEQ ID NO:44。

11.根據權利要求9所述的轉錄激活系統，其特征在于，進一步包括：10×UAS序列，所述10×UAS序列位于所述p-轉座酶啟動子的上游。

12.根據權利要求11所述的轉錄激活系統，其特征在于，所述10×UAS序列為SEQ IDNO:10。

13.根據權利要求9所述的轉錄激活系統，其特征在于，進一步包括：抗生素標記基因、vermilion基因、attB基因。

14.根據權利要求13所述的轉錄激活系統，其特征在于，所述抗生素標記基因為氨芐青霉素抗性基因，所述氨芐青霉素抗性基因的核酸序列為SEQ ID NO:7，所述vermilion基因序列為SEQ ID NO:8，所述attB基因序列為SEQ ID NO:9。