[發明專利]用于糞便樣本篩查碳青霉烯耐藥腸桿菌科細菌（CRE）的試劑盒及篩查方法

在審

• 申請號: 201811308088.8
• 申請日: 2018-11-05
• 公開（公告）號: CN109554438A
• 公開（公告）日: 2019-04-02
• 發明（設計）人: 王漢宇;李佳萍;黃子銜;胡潔;孫巧玲;舒玲斌;張嶸
• 申請（專利權）人: 王漢宇
• 主分類號: C12Q1/10
• 分類號: C12Q1/10
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 黃歡娣;邱啟旺

本發明公開了用于糞便樣本篩查碳青霉烯耐藥腸桿菌科細菌（CRE）的試劑盒及篩查碳青霉烯耐藥腸桿菌科細菌(CRE)的方法。試劑盒包含：糞便肉湯增菌液5ml：包含0.5wt％的氯化鈉，0.5wt％酵母粉，1wt％的植物蛋白胨，基質為無菌水，PH為7.0，已經過121℃高壓滅菌15min；含藥平板：含美羅培南的中國蘭平板，美羅培南的濃度為0.3ug/m。本發明采用2步法進行篩查，先第一次增菌獲得耐藥菌，第二次用藥板篩選獲得耐藥單菌落。該方法使用方便，大大減少了真菌等雜菌的干擾，篩選陽性率高，可以在臨床實驗室廣泛的應用，滿足臨床對CRE快速診斷的需求。

技術領域

本方法屬于分子生物學和醫學微生物技術領域，尤其涉及一種用于糞便樣本篩查碳青霉烯耐藥腸桿菌科細菌(CRE)的試劑盒及篩查方法。

背景技術

自2001年美國報道第1株產KPC型碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌以來，產KPC酶的腸桿菌科細菌在全世界各個國家和地區報道，甚至在以色列、希臘、意大利和部分南美洲國家等引起流行或爆發流行。這其中碳青霉烯類抗生素耐藥的肺炎克雷伯菌(Carbapenem-resistant Klebsiellapneumoniae，CRKP)尤為突出。我國CHINET細菌耐藥性監測的歷年數據顯示，腸桿菌科細菌對碳青霉烯類抗生素的耐藥率逐年增高，尤其是肺炎克雷伯菌，其對碳青霉烯類抗生素的耐藥率已從2005年的3％以下驟升至2017年的20％左右，并且全國各個地區CRKP分離率各不相同，2017年最新監測數據顯示分離率最高為河南省，高達53.01％；浙江省排名第三，分離率為36.79％。而碳青霉烯類耐藥大腸埃希菌、陰溝腸桿菌復合群和弗勞地檸檬酸桿菌的從2005年至2017年分離率都較為穩定，碳青霉烯類耐藥大腸埃希菌為1.0％左右，碳青霉烯類耐藥陰溝腸桿菌復合群為5.0％左右，碳青霉烯類耐藥弗勞地檸檬酸桿菌為10.0％左右。

產碳青霉烯酶導致的耐藥：腸桿菌科細菌中主要產A類和D類絲氨酸酶，部分菌株產生B類金屬酶。絲氨酸酶的共同特點是在其活性部位具有絲氨酸殘基，其中A類酶可以水解青霉素類、頭孢菌素類碳青霉烯類和氨曲南，主要基因型有bla_KPC、bla_IMI和bla_GES等，在CRKP中以bla_KPC-2型最為常見。D類酶可水解苯唑西林、氯唑西林和碳青霉烯類抗生素，又稱之為OXA型β-內酰胺酶，該類酶在不動桿菌中普遍存在，而在腸桿菌科細菌中較為少見，不同菌屬中OXA的型別也不同。B類碳青霉烯酶為金屬β-內酰胺酶，該類酶的特點是可以水解除單酰胺環類(如氨曲南)以外的所有β-內酰胺類抗菌藥物。代表基因型有bla_NDM、bla_VIM和bla_IMP，在CRE中的大腸埃希菌和陰溝腸桿菌復合體中以bla_NDM-1基因型最為常見。

針對CRE對臨床抗感染治療帶來的嚴峻挑戰，各國都給予了廣泛關注，全世界范圍內醫學界為應對CRE帶來的感染問題，均提出了相應的感染預防與控制措施，最大程度上制止多重耐藥菌的產生及傳播。歐洲疾病預防和控制中心強調了感染風險的重要性，將如下4點列為“風險”因素：在過去12個月內有在醫療機構過夜；過去12個月有長期透析史或化療史；過去12個月有CRE攜帶史；與CRE攜帶者有明確流行病學聯系。其主張對考慮存有風險的個體提前采取醫療隔離及接觸預防措施，同時積極進行CRE的篩查，且CRE陽性患者需進行額外的治療隔離措施。WHO則直接給出了8點CRE的預防和控制措施：多模式感染預防控制策略的實施；重視手衛生；無癥狀CRE定植菌的監測；重視接觸預防措施；重視病人的醫療隔離；環境的清潔；環境中CRE定植或污染的檢測培養；及時的檢測、審核和反饋。因此，對CRE的主動篩查勢在必行。