[發明專利]單管檢測15種HPV基因型的試劑盒及方法

在審

• 申請號: 201811307136.1
• 申請日: 2018-11-05
• 公開（公告）號: CN109402297A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 李旭新
• 申請（專利權）人: 泰普生物科學（中國）有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 福州市博深專利事務所(普通合伙) 35214
• 代理人: 林志崢;柯玉珊

本發明涉及一種單管檢測15種HPV基因型的試劑盒及方法，其中，所述試劑盒包括PCR反應試劑，所述PCR反應試劑包括：特異性擴增HPV的上游引物，其堿基序列如SEQ ID NO：1?3所示；特異性擴增HPV的下游引物，其堿基序列如SEQ ID NO：4?5所示；用于檢測HPV的探針，其堿基序列如SEQ ID NO：6?8所示。本發明具有在常規用量時，最大限度的減少引物、探針間的相互干擾，使得檢測性能大幅度的提升的優點。

技術領域

本發明涉及病原體檢測領域，特別涉及一種單管檢測15種HPV基因型的試劑盒及方法。

背景技術

人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)的存在與長期感染與多種皮膚黏膜的良、惡性增生，特別是宮頸癌的發生、發展密切相關，病毒的各型基因序列與其生物學行為存在著高度相關性。不同基因型別的HPV具有不同的致病危險性。人乳頭瘤病毒DNA的檢測和分型對了解相關病情、判斷預后及指導治療具有重要價值，特別是對女性生殖道腫瘤的癌情預報具有重要意義。

目前世界上發現的HPV有110余種亞型，20余種HPV亞型從宮頸癌組織中分離，根據其致病力的大小分為高危型和低危型兩種。低危型HPV主要引起生殖道肛周皮膚和陰道下部的外生性濕疣類病變、扁平濕疣類病變和低度子宮頸上皮內瘤樣變(CINI)，多呈一過性，可自然逆轉。高危型HPV主要導致CINII-III級病變和宮頸癌的發生，持續高危型HPV感染的CINⅠ級易進展為CINII-III。根據我國目前臨床和流行病調研資料，國內HPV高危型主要有16，18，31，33，35，39，45，51，52，53，56，58，59，66，68，73，82，CP8304等型別。

目前HPV感染的實驗室診斷方法主要有兩大類，第一類是檢查HPV的感染間接證據，如醋酸白試驗，細胞學及組織學檢查等。由于這些方法檢測的是HPV感染后對機體造成的異常變化，而HPV感染后對機體造成特定的異常變化需要一定的時間，因此這些方法只能檢測出亞臨床期和臨床期，檢測不出潛伏期，對臨床的早期診斷意義不大。

第二類是檢查組織中是否有HPV存在，如免疫組化，超薄切片電鏡技術或負染技術，以PCR為基礎和HPV核酸分子檢測等。由于這些方法檢測的是HPV感染的直接證據，在時間上可比第一類方法能更早地檢測出HPV感染，更適合早期診斷。免疫組化檢測標本中是否存在HPV抗原，敏感性低，特異性高，繁瑣、費時，目前已逐漸被淘汰。核酸印跡雜交的靈敏度及特異性均較高，但費時，繁雜，花費大，需用新鮮標本，實驗室條件要求高，目前還未普遍用于臨床。超薄切片電鏡技術及負染技術可在電鏡下看到典型的乳頭瘤病毒顆粒，但受實驗條件限制，一般的實驗室很少采用。以PCR為基礎和HPV核酸分子檢測成為目前HPV檢測的主流方法，包括測序分析法、限制性片段長度多態性、基因型特異性引物擴增法、型特異性核酸探針雜交法、實時熒光PCR技術。

以往采用實時熒光PCR技術同時檢測多種HPV型別的方法，為兼顧不同型別的序列多態性，需要使用較多不同序列的熒光探針。如每個序列的探針使用常規濃度，則探針總濃度增加，熒光背景升高。由于熒光PCR儀的熒光檢測量程有限，高熒光背景勢必導致可檢測的熒光增量減少，限制反應體系的檢測性能。如每個序列的探針使用較低濃度，雖然可以獲得較低的熒光背景，但由于反應前每個序列的探針絕對數量較少，也勢必影響反應后的熒光增量，同樣限制反應體系的檢測性能。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是：提供一種單管檢測15種HPV基因型的試劑盒及方法，在常規用量時，最大限度的減少引物、探針間的相互干擾，使得檢測性能大幅度的提升。

為了解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為：

一種單管檢測15種HPV基因型的試劑盒，所述試劑盒包括PCR反應試劑，所述PCR反應試劑包括：

特異性擴增HPV的上游引物，其堿基序列如SEQ ID NO：1-3所示；