[發明專利]一種高產雷帕霉素的吸水鏈霉菌有效
| 申請號： | 201811305747.2 | 申請日： | 2018-11-05 |
| 公開（公告）號： | CN109468253B | 公開（公告）日： | 2021-08-06 |
| 發明（設計）人： | 劉飛;郝榮華;張曉元;凌沛學;袁丹丹;陳勉;張金華;張林軍;張岱州 | 申請（專利權）人： | 山東省藥學科學院 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/76;C12P17/18;C12R1/55 |
| 代理公司： | 濟南泉城專利商標事務所 37218 | 代理人： | 李桂存 |
| 地址： | 250101 山東*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 高產 霉素 吸水 霉菌 | ||
1.一株吸水鏈霉菌（
2.一種如權利要求1所述吸水鏈霉菌的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
（1）按照吸水鏈霉菌NRRL 5491基因組4083721-4085064位堿基序列合成缺失第553位至939位堿基的序列，獲得截短基因；
（2）將截短基因插入含抗生素抗性基因的質粒，得到截短基因的重組質粒；
（3）將重組質粒轉化到感受態大腸桿菌中，得到重組大腸桿菌；
（4）將重組大腸桿菌中的截短基因導入吸水鏈霉菌；再通過抗性篩選得到包含截短基因的吸水鏈霉菌，即基因敲除的突變株。
3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（2）中，所述質粒為pKC1139；所述截短基因插入pKC1139的
步驟（4）中，抗性篩選方法為通過PCR的方法擴增抗性基因，能夠擴增出相應條帶的為陽性接合子；所述抗性基因為安普霉素抗性基因，其核苷酸序列如SEQ ID No: 3所示。
4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（3）中，利用熱激轉化法將截短基因的重組質粒導入大腸桿菌感受態細胞；大腸桿菌為ET12567感受態細胞；
步驟（4）中，通過接合轉移方式將截短基因導入吸水鏈霉菌。
5.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（4）后還包括對基因敲除的突變株產雷帕霉素能力進行篩選的步驟。
6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述篩選步驟為以白色念珠菌作為生物檢定菌，采用濾紙片擴散法進行高通量篩選；抑菌圈大的菌株即為目標菌株；
或者將菌株作為搖瓶發酵，發酵液經2倍體積無水乙醇浸提后，取離心的上清液進行HPLC定量檢測，產量最高的菌株即為目標菌株；
或者先采用濾紙片擴散法以白色念珠菌作為生物檢定菌進行高通量篩選；將抑菌圈大的菌株再進行搖瓶發酵，發酵液經2倍體積無水乙醇浸提后，取離心的上清液進行HPLC定量檢測，產量最高的菌株即為目標菌株。
7.如權利要求1所述吸水鏈霉菌在生產雷帕霉素中的用途。
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