[發明專利]一種血清中膽固醇的檢測方法

有效

• 申請號: 201811304853.9
• 申請日: 2018-11-02
• 公開（公告）號: CN109520979B
• 公開（公告）日: 2021-07-20
• 發明（設計）人: 李順興;鄭鳳英;李躍海
• 申請（專利權）人: 閩南師范大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 廈門市首創君合專利事務所有限公司 35204
• 代理人: 李雁翔;姜謐

本發明公開了一種血清中膽固醇的檢測方法，包括如下步驟：(1)將β?CD@AuNPs、CQDs和適量以無水乙醇為溶劑制備的膽固醇儲備液混合后，配制不同濃度的膽固醇標準溶液，于特定熒光條件下繪制工作曲線；(2)獲得待測血清，進行檢測；(3)將步驟(2)的檢測結果代入工作曲線中，得到待測血清中的膽固醇濃度。本發明不僅能夠克服色譜法，電化學法，比色法，等離子體吸收光譜法等技術的缺陷，且具檢測線性范圍廣、靈敏度較高、選擇性好等優勢。

技術領域

本發明屬于生物小分子分析檢測技術領域，具體涉及一種血清中膽固醇的檢測方法。

背景技術

膽固醇最早是從膽石中發現的，其廣泛存在于動物體內，是所有動物細胞膜的基本結構成分，在維持膜結構完整性和流動性方面發揮重要作用，而且合成膽汁酸，維生素D和激素都需要膽固醇做原料。健康人血清中總膽固醇的正常水平一般低于5.2mmol·L^-1。血液中膽固醇水平過高，稱為高膽固醇血癥，會明顯增加冠心病，高血壓和動脈粥樣硬化等血管疾病的風險。另一方面，膽固醇的缺乏被認為與抑郁癥、癌癥和腦出血等疾病的出現相關聯。隨著生活水平的提高，膽固醇異常導致的冠心病、糖尿病和高血壓等疾病呈增長趨勢，并且膽固醇被世界衛生組織國際癌癥研究機構列為3類致癌物。因此，開發一種檢測血清中膽固醇含量的方法具有極為重要的意義。

目前開發了多種分析方法用于膽固醇含量的檢測，如色譜和電化學結合法，色譜法，電化學法，比色法，等離子體吸收光譜法等。但是大多數方法需要繁瑣的實驗過程且實驗成本高；或者依賴于膽固醇氧化酶的高選擇性催化反應進行膽固醇測定，但是此方法中酶易失活導致方法的不穩定性和成本昂貴；或者方法中使用了具有危害性的化學試劑。因此，有必要開發一種選擇性高，成本低，綠色環保的方法進一步改善目前方法的缺陷。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術缺陷，提供一種血清中膽固醇的檢測方法。

本發明的技術方案如下：

一種血清中膽固醇的檢測方法，包括如下步驟：

(1)將β-CD@AuNPs、CQDs和適量以無水乙醇為溶劑制備的膽固醇儲備液混合后，配制不同濃度的膽固醇標準溶液；將熒光激發波長固定在390nm，分別記錄不同濃度的膽固醇標準溶液的熒光發射光譜，以熒光發射峰Em＝528nm的強度作為定量依據，以熒光恢復效率(F-F₀)/F₀對不同膽固醇濃度做線性擬合，測定檢測限，F₀為不加膽固醇的熒光發射峰Em＝528nm的強度，F對應不同膽固醇標準溶液的濃度的熒光發射峰Em＝528nm的強度；當膽固醇濃度為10-210μmol·L^-1，熒光恢復效率(F-F₀)/F₀與膽固醇濃度呈現良好的線性關系，獲得線性工作曲線y＝0.0052x-0.0139，R²＝0.996，y＝(F-F₀)/F₀，x為膽固醇濃度；上述β-CD@AuNPs是以氯金酸(HAuCl₄)溶液為前驅體，以β-環糊精(β-CD)為還原劑和穩定劑，加熱回流一步制備而成，上述CQDs是以氯化十六烷基吡啶(CPC)溶液為前驅體，通過超聲一步法合成；

(2)將新鮮血液于室溫下保存過夜，隔天取其中淡黃色的上清液離心，獲得血清；在上述血清中加入0～160μmol·L^-1的膽固醇標準溶液，根據步驟(1)的參數進行熒光測定，重復測定至少三次，獲得相應的熒光發射峰Em＝528nm的強度；

(3)將步驟(3)獲得的熒光發射峰Em＝528nm的強度代入上述線性工作曲線中，獲得血清中的膽固醇濃度。