[發明專利]一種氨基酸類底物及其制備方法和用途

在審

• 申請號: 201811303798.1
• 申請日: 2018-11-03
• 公開（公告）號: CN109265373A
• 公開（公告）日: 2019-01-25
• 發明（設計）人: 楊書彬;朱飛飛;馬建軍;劉志磊;楊紅云;付光宇;王則宇;吳學煒
• 申請（專利權）人: 鄭州安圖生物工程股份有限公司
• 主分類號: C07C277/08
• 分類號: C07C277/08;C07C279/14;C07D311/16;G01N21/78
• 代理公司: 鄭州異開專利事務所(普通合伙) 41114
• 代理人: 王霞

本發明公開了一種氨基酸類底物，其結構通式如圖1所示。本發明通過對該氨基酸類底物中二肽的合成工藝及二肽與色原連接工藝的開發創新、提取純化工藝的創新及應用驗證，使得產品各步反應收率有了較大提高，色澤接近白色，減小了底物顏色在鑒定過程中的影響，并較大程度提高了需氧菌群陰道炎檢測過程中的靈敏度及檢測準確度。本發明制備的底物為鹽酸鹽形式，以鹽酸鹽形式進行檢測應用時可較大程度提高底物的溶解性；在檢測應用中按照需氧菌群陰道炎檢測的配制要求進行相應配制工作，并依據檢驗標準對合成底物顯色性能與市場已有的需氧菌群陰道炎檢測的顯色性能進行對比檢驗，顯色性能優于市場上需氧菌群陰道炎檢測試劑的顯色性能。

技術領域

本發明涉及體外檢測用試劑，尤其是涉及一種可穩定顯色的氨基酸類底物，本發明還涉及該底物的制備方法和用途。

背景技術

需氧菌群陰道炎（AV）是臨床新確定的一種陰道炎，與細菌性陰道炎（BV）、滴蟲性陰道炎（TV）的病原體不同，治療方案和結局也不相同。AV患者的臨床癥狀、體征和TV患者極為相似，若不明確診斷，易造成誤診。所以準確區別這兩種陰道炎，對陰道感染患者的診療具有重要意義。

目前常用的檢測需氧菌陰道炎的方法是：①細菌鑒定儀法，該法準確度較高，但存在費用昂貴，無法直接上標本及純菌培養時間長等缺點；②普通培養加生化鑒定法即金標準法：該法特異性較好，但需進行細菌純培養，鑒定試驗繁瑣； ③分子生物學法即PCR法：該法快速敏感，但假陽性難以排出，對人員和設備要求均較高。

由于上述檢測技術或成本高、或操作繁瑣、或設備要求高、或培養時間較長、或靈敏度較低，因此兼具靈敏度高、特異性好、操作簡便、培養時間短等優點的檢測方法的開發研究具有重要的市場應用價值。基于此，研究出具有高靈敏度、不需借助紫外照射觀察即可穩定顯色的底物合成方法及其應用具有重要的現實意義。

發明內容

本發明的目的在于提供一種可穩定顯色的氨基酸類底物，本發明還公開了該底物的制備方法和在需氧菌群陰道炎檢測中的應用。

為實現上述目的，本發明可采取下述技術方案：

本發明所述的氨基酸類底物，其結構式為：

。

上述氨基酸類底物的衍生物可以為：

，，

，，

。

本發明所述氨基酸類底物的制備方法包括下述步驟：

第一步，將甘氨酸化合物在一定濃度的氫氧化鈉水溶液中與適當量的二碳酸二叔丁酯反應，反應完成后經酸洗淬滅后收集有機相進行干燥并減壓濃縮，除去溶劑得到白色固體產物備用；

第二步，將第一步得到的白色固體于二氯甲烷溶液中在催化劑4-二甲氨基吡啶作用與N-羥基丁二酰亞胺反應，反應完成后對反應母液進行過濾，濾液部分進行酸洗，酸洗后對有機相進行干燥，干燥后對有機相進行減壓濃縮，除去溶劑，剩余殘留物溶于少量乙酸乙酯中并于-20℃條件下進行重結晶，過濾后得到淺黃色固體產物備用；

第三步，將第二步得到的淺黃色固體與L-精氨酸在四氫呋喃中攪拌反應，反應完成后用乙酸乙酯/純化水對母液進行萃取，收集水相并對水相物質進行柱層析純化，收集水下物質并減壓濃縮，得到雪白色發泡狀固體化合物備用；

第四步，將第三步得到的化合物在少量無水甲醇中分散均勻后，滴加相同摩爾量的濃鹽酸， 室溫條件下攪拌0.5h，除去溶劑得到米白色發泡狀固體化合物備用；

第五步，以第四步得到的化合物與 β-萘胺為原料，室溫下在二氯甲烷溶液中經縮合試劑催化反應，反應完成后經濃縮、柱層析純化得到淺黃色發泡狀固體化合物備用；