[發明專利]一種利用生物酶技術制備人工牛黃的方法

有效

• 申請號: 201811303048.4
• 申請日: 2018-11-02
• 公開（公告）號: CN109498656B
• 公開（公告）日: 2022-11-22
• 發明（設計）人: 李賢明;王璇;李樂水
• 申請（專利權）人: 丁洪勇
• 主分類號: A61K35/413
• 分類號: A61K35/413
• 代理公司: 深圳宏創有為知識產權代理事務所(普通合伙) 44837
• 代理人: 張海基

一種利用生物酶技術制備人工牛黃的方法，包括生物酶制備和人工牛黃制備兩個過程，人工牛黃制備主要包括在新鮮膽汁中加入維生素C，加熱至90℃，持續30分鐘；加入生物酶（一）35～37℃反應12小時；調PH值7.8～8.5，加入胰蛋白酶攪勻，保持37℃，放置12小時；攪拌下滴加25%硫酸調pH值2～3；在0～8℃靜置24～36小時，棄上清液；5000r/min離心沉淀；將沉淀物抽濾，純凈水洗至中性；將濕性提取物加入維生素C，用95%乙醇溶液回流溶解過濾，獲析出物與濾液分置；凈置過濾，收集濾出物；加入氯仿，回流提取，棄掉殘渣；回收氯仿至結晶析出；加入95%乙醇溶液適量，減壓蒸餾至無殘留氯仿至結晶析出，濾出結晶；將上述濾出物與結晶干燥，粉碎混合得人工牛黃成品。

（一）技術領域

本發明涉及一種人工牛黃的制備方法，尤其是一種利用生物酶技術制備天然品質級人工牛黃的方法，屬于生物制藥技術領域。

（二）背景技術

牛黃，為牛科動物黃牛或水牛的膽囊、膽管或肝管內的復合成分結石；牛患肝、膽結石癥的機會很少，僅占千分之幾，因此天然牛黃十分難得，故數量極少，是一種珍貴稀有的中藥，難能滿足臨床、科研需要。目前，國際市場上1克牛黃比1克黃金的價要貴4倍多，價值與鉆石相仿。由于天然牛黃極為稀缺，醫藥無取代品；為滿足臨床醫療需要，我國“藥典”將人工牛黃列入收載；近年來國內對牛黃研究有了飛速發展，主要有將異物植入活體動物膽囊法的化學合成法和體外培育法等研究嘗試，目前，人工牛黃生產制備工藝、方法各式各樣，大多采用酸堿法，普遍存在收率低，污染環境，有效成分含量低，操作過程危險等缺點。而且，通過上述方法人工生產的牛黃與天然牛黃在品質上仍然存有一定差別。

（三）發明內容

本發明為了彌補現有技術的不足，提供了一種利用生物酶技術制備天然品質級人工牛黃的方法。

本發明是通過如下方案實現的：

本發明所用的主要原料，與天然牛黃形成過程中所需的主要原料相同，即新鮮牛膽汁、豬膽汁；采用生物酶技術，經加熱、調PH值、添加生物酶，再經過反應、凈置、冷藏、過濾、精制提純，獲的近天然品質級的人工牛黃；

本發明的有益效果是成品收率高，有效成分含量高，無環保污染，生產工藝簡單，質量可控、設備投資少，能夠連續生產。

（四）具體實施方式

以下是本發明一種利用生物酶技術制備人工牛黃的方法的一個具體實施例，通過以下方法、步驟實現：

一、膽囊清潔

1、結扎膽總管：將現宰殺的牛或豬的新鮮膽囊由膽總管近端向遠端用棉線依次結扎兩次，間隔1～2cm。

2、清潔膽囊外壁：

除去膽囊外壁脂肪及其它組織，先用常水沖洗，再用純化水沖洗。

3、掛涼瀝干外壁。

4、將掛涼瀝干外壁的膽囊，浸泡入氫氧化鈣溶液中30分鐘。

5、純化水沖洗清潔膽囊外壁，剪除遠端扎線結，75%乙醇涂擦備用。

二、膽汁收集：

將清潔后膽囊浸泡入50℃95%乙醇中10分鐘，剪除近端扎線結，瀝出膽汁收存入適宜容器中。

三、生物酶制備：

生物酶（一）

A制備培養基：

成分組成：蛋白胨5g；瓊脂5g； 馬鈴薯蔗糖5g；葡萄糖酸鈣2g；橄欖油5g；MgSO4·7H2O 1g；K2HPO4 1g；(NH4)2SO4 10g

制備過程：