[發(fā)明專利]一種基于代謝組學(xué)與全成分半定量分析的中藥制劑質(zhì)量評(píng)價(jià)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811299665.1
• 申請(qǐng)日: 2018-11-02
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109270187B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-05-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 束雅春
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇省中醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N30/06
• 分類號(hào): G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 柏尚春

1.一種基于代謝組學(xué)與全成分半定量分析的中藥制劑質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）取待評(píng)價(jià)銀翹類中藥制劑，加入內(nèi)標(biāo)樣品Etoposide-d3一起制成待測(cè)溶液，然后重復(fù)進(jìn)樣UPLC- QTOF-MS系統(tǒng)；所述UPLC-QTOF-MS 系統(tǒng)中色譜柱為Waters 超高效液相色譜柱BEH C18，內(nèi)聯(lián)高性能的濾過(guò)器，正離子流動(dòng)相 A: 0.1 % 醋酸溶液，B: 乙腈；負(fù)離子流動(dòng)相 A: 0.05% 氫氧化銨溶液，B: 乙腈；梯度洗脫：0 - 4 min，5% B； 4 - 7 min，5% -10% B； 7 - 20 min，10% - 15% B； 20 - 30 min，15% - 22% B；30 - 35 min， 22% - 35%B；35 - 40 min，35% - 50% B； 40 - 45 min， 50% - 70% B；45 - 50 min，70% - 90% B；50 - 52 min， 5% B；52 - 60 min, 5% B；流速: 0.4 mL/min，柱溫: 60℃；進(jìn)樣量: 5μL；在分析樣品之前，該色譜柱與流動(dòng)相平衡至少30 min，流速為0.4 mL/min；質(zhì)譜條件：電噴霧離子源，采用正離子ESI+ 和負(fù)離子 ESI- 模式掃描，使用Agilent MassHunter數(shù)據(jù)采集軟件，版本B.05.01，為每個(gè)ESI模式獲取色譜和光譜數(shù)據(jù)；質(zhì)譜儀的操作參數(shù)如下：干燥氣體N₂溫度：350°C；干燥氣流速10.0 L/min；霧化氣壓N₂，35 psi；鞘氣流速：11.0 L/min；鞘氣N₂溫度，325°C；毛細(xì)管電壓：4000V；噴嘴電壓，500V；碎裂電壓：100V；錐孔電壓：65V；碰撞能量（CE）：10、20和40 eV；掃描范圍50 m/z-1000 m/z，采用內(nèi)部實(shí)時(shí)質(zhì)量校正，正離子模式的校準(zhǔn)溶液在m / z 121.0508和922.0098 m / z，負(fù)離子模式的校準(zhǔn)溶液在112.9885 m / z和1033.9881 m / z，貫穿整個(gè)采集過(guò)程；

（2）在正負(fù)離子模式下，采集數(shù)據(jù)，然后進(jìn)行批量歸一化分析；

（3）利用上述步驟（2）處理的數(shù)據(jù)文件，導(dǎo)入到Agilent專業(yè)MPP軟件中，通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)搜索和分子匹配生成化合物信息；

（4）對(duì)于多元數(shù)據(jù)分析，通過(guò)提取的數(shù)據(jù)文件，從質(zhì)量、保留時(shí)間和峰值區(qū)域的角度，利用分析軟件對(duì)待評(píng)價(jià)制劑進(jìn)行判別分類；

（5）進(jìn)行化學(xué)成分半定量分析，通過(guò)已知內(nèi)標(biāo)的濃度及特征，將其它化合物特征與峰值與內(nèi)標(biāo)比較，從而得到半定量分析結(jié)果。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于代謝組學(xué)與全成分半定量分析的中藥制劑質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）取待評(píng)價(jià)制劑，加入內(nèi)標(biāo)樣品一起制成待測(cè)溶液，然后重復(fù)進(jìn)樣UPLC- QTOF-MS系統(tǒng)；

（2）在正負(fù)離子模式下，首先運(yùn)用數(shù)據(jù)采集軟件Agilent MassHunter定性分析軟件，然后使用Agilent Profinder軟件進(jìn)行批量歸一化分析；

（3）將每一種劑型新的數(shù)據(jù)文件導(dǎo)入到Agilent專業(yè)MPP軟件中，用于METLIN AM數(shù)據(jù)庫(kù)搜索和分子匹配生成化合物信息；

（4）對(duì)于多元數(shù)據(jù)分析，通過(guò)Profinder軟件提取的數(shù)據(jù)文件，從質(zhì)量、保留時(shí)間和峰值區(qū)域的角度，導(dǎo)入MetaboAnalyst分析軟件，分別選用PCA、PLS-DA、OPLS-DA 3種模式識(shí)別方法對(duì)待評(píng)價(jià)制劑進(jìn)行判別分類；

（5）Mass Hunter定量分析軟件用于化學(xué)成分半定量分析，通過(guò)已知內(nèi)標(biāo)的濃度及特征，將其它化合物特征與峰值與內(nèi)標(biāo)比較，從而得到半定量分析結(jié)果。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基于代謝組學(xué)與全成分半定量分析的中藥制劑質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，其特征在于，步驟（2）的方法為：由Profinder軟件的每個(gè)分子特征提取的數(shù)據(jù)文件和相應(yīng)的數(shù)據(jù)文件由MassHunter數(shù)據(jù)采集軟件導(dǎo)入到Agilent MassHunter定性分析軟件中，提取一級(jí)、二級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)，及保留時(shí)間數(shù)據(jù)。