[發明專利]牛血清白蛋白磁性仿生免疫分析試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201811296410.X
• 申請日: 2018-11-01
• 公開（公告）號: CN109517170B
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: 傅強;陳國寧;郭鵬琦;舒花;王燕;王璐;常春
• 申請（專利權）人: 西安交通大學
• 主分類號: C08G73/06
• 分類號: C08G73/06;C08K3/36;C08K3/22;C08J9/26;B01J20/26;B01J20/30;G01N33/68
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 范巍

本發明公開了一種牛血清白蛋白磁性仿生免疫分析試劑盒及其應用，試劑盒包括BSA磁性分子印跡聚合物、Biotin?BSA、BSA標準品溶液和HRP?SA。BSA磁性分子印跡聚合物是采用表面聚合法合成的對牛血清白蛋白(BSA)具有識別功能的仿生抗體，具體通過制備磁性納米微球、包覆二氧化硅層、多巴胺聚合形成分子印跡聚合物層、除去結合于分子印跡聚合物上的模板分子等步驟獲得。該試劑盒可用于牛血清白蛋白的含量分析和測定，具有準確性高、穩定性好、適應性強、操作方便和成本低廉的優點。

技術領域

本發明屬于基于生物素-親和素系統的免疫吸附分析檢測領域，具體涉及一種牛血清白蛋白(BSA)磁性仿生免疫分析試劑盒。

背景技術

免疫分析是利用待測物質與其相對應的抗體之間特異性結合的特點而建立起來的一種高選擇性分析方法，具有操作簡便、靈敏快速以及可以實現高通量測定等優點，在實際的分析檢測工作中得以廣泛應用。傳統的免疫分析是基于生物抗體作為識別元件的，而生物抗體制備過程繁瑣、周期性長且對外界環境耐受能力差。分子印跡技術能夠制備對目標分子具有高度的選擇識別作用的分子印跡聚合物，與生物抗體相比具有制備過程簡便、穩定性好、耐極端環境能力強、成本低廉等優點，因此將分子印跡聚合物作為仿生抗體用于待測物質的識別和檢測具有一定的優勢。

酶聯免疫分析是免疫分析中常用的分析方法，通常用于免疫分析的酶只能在水相中使用。而大部分分子印跡聚合物是采用如本體法、原位法和沉淀法等常用的方法，并在有機相中完成制備，所得分子印跡聚合物往往需要在有機相中實現識別，這限制了分子印跡聚合物代替生物抗體應用于免疫分析。

目前尚未見到利用水相介質制備的BSA分子印跡聚合物功能材料，并作為仿生抗體應用于免疫吸附試驗或檢測的報道。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術中的缺點，提供一種牛血清白蛋白磁性仿生免疫分析試劑盒及其應用。

為了達到上述目的，本發明采用了以下技術方案：

一種牛血清白蛋白磁性分子印跡聚合物仿生抗體，該仿生抗體包括牛血清白蛋白磁性分子印跡聚合物微球，所述分子印跡聚合物微球包括磁性納米微球(內核)、包覆在磁性納米微球表面的二氧化硅界面層以及包覆在二氧化硅界面層上的牛血清白蛋白分子印跡聚合物層。

優選的，所述牛血清白蛋白分子印跡聚合物層的厚度為20～40nm，磁性納米微球的粒徑為300～500nm。本發明考慮了分子印跡聚合物層厚度對內核磁性的影響，也兼顧了對于BSA的識別能力，使得分子印跡聚合物微球既可在外界磁場作用下，快速的富集(方便固定使用)和分離，又確保對BSA進行有效識別。

優選的，所述仿生抗體還包括用于封閉牛血清白蛋白分子印跡聚合物層上的牛血清白蛋白非特異性結合位點的功能蛋白(功能蛋白的來源可以為明膠)。

優選的，所述牛血清白蛋白分子印跡聚合物層是以牛血清白蛋白(BSA)為模板分子，通過多巴胺(DA)在水相-二氧化硅界面聚合反應并在聚合后去除模板分子而形成的。

優選的，所述水相-二氧化硅界面是通過將表面包覆有二氧化硅的磁性納米微球分散在偏堿性的緩沖溶液(pH≤8.5，例如PBS緩沖液、鹽酸-tris緩沖液等)中而獲得的。通過對于pH的控制，確保分子印跡聚合物微球對BSA進行有效識別。

上述牛血清白蛋白磁性分子印跡聚合物仿生抗體的制備方法，包括以下步驟：

1)制備磁性納米微球；

2)在磁性納米微球表面包覆二氧化硅(SiO₂)，得到SiO₂磁性納米微球復合物(Fe₃O₄-SiO₂)；