[發明專利]同時抗CD70和CD47的重鏈抗體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201811294249.2
• 申請日: 2018-11-01
• 公開（公告）號: CN109293778B
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發明（設計）人: 郭志剛;夏小珍
• 申請（專利權）人: 浙江藍盾藥業有限公司
• 主分類號: C07K16/46
• 分類號: C07K16/46;C07K16/28;C12N15/70;C12N1/21;A61K39/395;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 楊曉莉

本發明公開了一種同時抗CD70和CD47的重鏈抗體，該重鏈抗體為駱駝源獲得，具體制備方法為，利用噬菌體抗體庫技術篩選，使用基因工程方法制備所述單克隆抗體或其片段的DNA表達載體，轉染宿主細胞獲得含有所述單克隆抗體或其片段的細胞培養上清，并經純化制備得到目的蛋白。本發明所述重鏈抗體可以應用于制備治療腫瘤的藥物，為進一步的抗體藥物研發提供理論基礎。

技術領域

本發明屬于抗體藥物技術，特別是涉及一種同時抗CD70和CD47的重鏈抗體及其制備方法和應用。

背景技術

CD70是Ⅱ型跨膜糖蛋白，也屬TNF家族。hCD70是一個由193個氨基酸組成的三聚體，其中胞膜外的155個氨基酸序列與TNF配體超家族的其他成員具有一定的同源性。細胞因子受體CD27是腫瘤壞死因子受體(TFNR)超家族的成員，其在細胞生長和分化以及凋亡中起作用。CD27的配體是CD70，屬于配體的腫瘤壞死因子家族。CD70為193個氨基酸的多肽，其具有20個氨基酸的親水性N端結構域和包含2個潛在的N連接糖基化位點的C端結構域(Goodwin，R.G.等(1993)Cell73：447-56；Bowman等(1994)Immunol152：1756-61)。基于這些特性，確定CD70是具有細胞外C端部分的II型跨膜蛋白。

CD70在活化的T和B淋巴細胞以及樹突狀細胞上瞬時地存在(Hintzen等(1994)J.Immunol.152：1762-1773；Oshima等(1998)Int.Immunol.10：517-26；Tesselaar等(2003)J.Immunol.170：33-40)。除了在正常細胞上表達外，已經在不同類型的癌癥中報道了CD70的表達，所述癌癥包括腎細胞癌、轉移性乳腺癌、腦腫瘤、白血病、淋巴瘤和鼻咽癌(Junker等(2005)J Urol.173：2150-3；Sloan等(2004)Am J Pathol.164：315-23；Held-Feindt和Mentlein(2002)Int J Cancer98：352-6；Hishima等(2000)Am J SurgPathol.24：742-6；Lens等(1999)Br J Haematol.106：491-503)。還提出了CD70與CD27的相互作用在細胞介導的自身免疫疾病和TNF-α產生的抑制中起作用(Nakajima等(2000)J.Neuroimmunol.109：188-96)。

CD27-CD70是共刺激受體-配體分子對，其相互作用提供的共刺激信號在多種自身免疫性疾病的發生、發展中起著促進作用，選擇性干預這條共刺激通路能緩解或減輕某些自身免疫性疾病的發展，如sLE、RA。因此其可能成為自身免疫性疾病的一個特異性的治療靶目標。

CD47是細胞表面免疫球蛋白之一，可以結合整合素和血小板蛋白，涉及多種生理功能，例如細胞轉移，T細胞和DC細胞激活，軸突發育等功能。主要的，CD47是通過與吞噬細胞表面的SIRPα相結合，酪氨酸磷酸酶激活，阻止肌球蛋白在吞噬突觸亞膜的積累來抑制吞噬作用。在這個過程中，CD47代表的是“別吃我”，來阻礙吞噬作用的自身攻擊。實際上，CD47廣泛地表達在人體的正常組織上，說明它的調節是廣泛的。但同時它也在白血病(AML、慢性骨髓白血病、急性成淋巴細胞性白血病(ALL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、多發性骨髓瘤(MM)、膀胱癌、實體瘤等細胞表面多表達。CD47在腫瘤細胞上的表達要高于正常細胞的表達，同時幫助腫瘤逃避吞噬細胞監控。因此CD47可以成為免疫治療的重要靶點。

發明內容

發明目的：針對上述背景技術，本申請提供了一種同時抗CD70和CD47的重鏈抗體，并提供了其制備方法和應用。

技術方案：本申請所述的一種同時抗CD70和CD47的重鏈抗體，任選地包含一種或多種選自SEQ ID NO：11的氨基酸序列，其中，

X₁為Q或氨基酸，

X₂為A或氨基酸，

X₃為Q或K，