[發(fā)明專利]一種NK細胞exosomes可控規(guī)模化的制備方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201811290297.4 | 申請日： | 2018-10-31 |
| 公開（公告）號： | CN109439625A | 公開（公告）日： | 2019-03-08 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 崔大祥;潘少君;張倩;章阿敏;黃志成 | 申請（專利權(quán)）人： | 上海交通大學(xué) |
| 主分類號： | C12N5/0783 | 分類號： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 上?？剖⒅R產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31225 | 代理人： | 趙志遠 |
| 地址： | 200030 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 超高速離心 制備 沉淀 磷酸鹽緩沖液 取上清液 規(guī)?；?/a> 稀釋液 可控 培養(yǎng)基上清液 標(biāo)志性蛋白 蛋白表達量 離心上清液 濃縮上清液 安全系數(shù) 粒徑分布 超濾管 低轉(zhuǎn)速 高轉(zhuǎn)速 透析袋 稀釋 透析 并用 攜帶 檢測 | ||
1.一種NK細胞exosomes可控規(guī)模化的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)收集NK細胞培養(yǎng)基上清液，并用磷酸鹽緩沖液進行稀釋，得到稀釋液；
(2)將稀釋液依次在低轉(zhuǎn)速和高轉(zhuǎn)速下離心，且每次離心后取上清液棄沉淀，在高轉(zhuǎn)速下離心后得到離心上清液；
(3)將離心上清液置于超濾管中進行離心，取上清液，得到的濃縮上清液進行超高速離心，超高速離心后取沉淀；
(4)將步驟(3)超高速離心后得到的沉淀置于磷酸鹽緩沖液中并轉(zhuǎn)移至透析袋中進行透析，即得所述NK細胞exosomes。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種NK細胞exosomes可控規(guī)?；闹苽浞椒?，其特征在于，所述的磷酸鹽緩沖液中包含KCl、NaCl、KH2PO4和Na2HPO4，其中，所述KCl、NaCl、KH2PO4和Na2HPO4的質(zhì)量比為(0.1～0.3)：(6～10)：(0.2～0.3)：(1～2)，其中，所述磷酸鹽緩沖液中鹽的總質(zhì)量濃度為8.88-9.88g/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種NK細胞exosomes可控規(guī)?；闹苽浞椒?，其特征在于，所述的磷酸鹽緩沖液與NK細胞培養(yǎng)基上清液的體積比為(1～40)：1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種NK細胞exosomes可控規(guī)?；闹苽浞椒?，其特征在于，所述的低轉(zhuǎn)速為2000～3000rpm，低轉(zhuǎn)速下離心時間為5～15min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種NK細胞exosomes可控規(guī)模化的制備方法，其特征在于，所述的高轉(zhuǎn)速為8000～11000rpm，高轉(zhuǎn)速下離心時間為10～35min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種NK細胞exosomes可控規(guī)?；闹苽浞椒ǎ涮卣髟谟冢龀瑸V管的規(guī)格為100～150kDa，在超濾管中的離心轉(zhuǎn)速為3000～4000rpm，離心時間為10～30min。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種NK細胞exosomes可控規(guī)?；闹苽浞椒?，其特征在于，所述超高速離心的轉(zhuǎn)速為8000～100000g，超高速離心的時間為60～90min。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種NK細胞exosomes可控規(guī)?；闹苽浞椒?，其特征在于，所述透析袋的孔徑為30～35nm，透析時間為3～9h，透析時加入的磷酸鹽緩沖液與步驟(3)超高速離心后得到的沉淀的質(zhì)量比為(200～5000)：1。
9.根據(jù)權(quán)利要求1～8任一所述的一種NK細胞exosomes可控規(guī)?；闹苽浞椒?，其特征在于，整個制備過程中，溫度為4～37℃。
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