[發明專利]銀杏內生真菌的分離篩選方法在審
| 申請號： | 201811289627.8 | 申請日： | 2018-10-31 |
| 公開（公告）號： | CN109182151A | 公開（公告）日： | 2019-01-11 |
| 發明（設計）人： | 宋育剛 | 申請（專利權）人： | 貴州四季碩果農業開發有限責任公司 |
| 主分類號： | C12N1/14 | 分類號： | C12N1/14;A01P3/00 |
| 代理公司： | 貴陽中新專利商標事務所 52100 | 代理人： | 劉楠 |
| 地址： | 550399 貴*** | 國省代碼： | 貴州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 內生真菌 銀杏 菌絲 分離篩選 備用 病原菌 液體發酵培養基 果仁 內生真菌菌株 發酵上清液 恒溫箱培養 菌株發酵液 切割成小片 無菌培養皿 保藏 表面消毒 分離純化 高效抑制 菌種生長 取上清液 無菌條件 無菌組織 果肉 接種鉤 培養瓶 三角瓶 抑制率 銀杏根 菌落 分裝 菌餅 冷卻 采集 篩選 移植 | ||
1.一種銀杏內生真菌的分離篩選方法，其特征是包括以下步驟：
(1)采集銀杏根、莖、葉、果肉、果仁；
(2)將步驟(1)銀杏組織經表面消毒后，直接種植于PDA培養基平皿上，置26℃～28℃恒溫箱培養，從中選出表面無任何菌種生長的組織；
(3)將步驟(2)的無菌組織在無菌條件下切割成小片移植于PDA培養基上，置28℃恒溫箱培養，至樣品周圍長出菌絲時，采用尖端菌絲挑取法，挑取形態不同的菌落，經純化后轉接到PDA斜面培養基備用；
(4)其各組分與每升所含的質量為蛋白胨0-5.5g、玉米粉1-8g、麩皮0-10g、可溶性淀粉0-10g、葡萄糖1-8g、黃豆餅粉1-9g、CaCO30.5-2.5g、NH4NO30.1-1.2g、MgSO40.1-0.9g、KH2PO40.1-0.9g；
(5)將步驟(4)液體發酵培養基分裝在三角瓶中，用接種鉤挑取少許經步驟(3)分離純化的內生真菌菌絲于培養瓶中，置28℃搖床，200r/min，振蕩培養4天，發酵液經5000r/min離心10min，取發酵上清液；
(6)取步驟(5)各上清液與冷卻至50℃的PDA培養基按毫升體積1∶9混勻于無菌培養皿內，凝固后在每個培養基平面放1個直徑為4mm的供試菌餅，置28℃培養箱培養后，計算各菌株發酵液對供試病原菌的抑制率；
(7)將步驟(6)篩選出的高效抑制率內生真菌菌株進行保藏，備用。
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