[發(fā)明專利]以蘋果渣為原料制備蘋果酸的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201811289624.4
• 申請日: 2018-10-31
• 公開（公告）號: CN109295117A
• 公開（公告）日: 2019-02-01
• 發(fā)明（設計）人: 宋育剛
• 申請（專利權）人: 貴州四季碩果農業(yè)開發(fā)有限責任公司
• 主分類號: C12P7/46
• 分類號: C12P7/46;C12P19/04;C12R1/66
• 代理公司: 貴陽中新專利商標事務所 52100
• 代理人: 劉楠

1.一種以蘋果渣為原料制備蘋果酸的方法，其特征在于將蘋果渣依次經過去毒處理、接種、發(fā)酵和提取的工藝步驟后制得L-蘋果酸產品。

2.根據權利要求1所述的制備蘋果酸及微晶纖維素的方法，其特征在于包括下述的工藝步驟：

2.1蘋果酸的制備

2.1.1去毒處理--將一定量的蘋果原渣放入不銹鋼反應容器內，加入6～10倍量的純凈水，保持溫度在25℃時，在容器內分別加入占渣水量0.02％的維生素C、1％的檸檬素和0.1％的NaCl，浸泡24小時后，渣液通過離心機離心，去除水分，得經去毒處理后的蘋果渣；

2.1.2接種--將保存在麥芽汁瓊脂斜面上的曲霉₁₆₃孢子用無菌水洗下，接到三角瓶中；瓶中裝有液體培養(yǎng)基，在22～28℃靜置培養(yǎng)2～4天，待長出大量孢子后接到內裝有種子培養(yǎng)基的種子罐中，裝液量占罐體容積量的70％；三角瓶和種子罐內裝有下述種子培養(yǎng)基(克/升)：

經去毒處理后的蘋果渣50，葡萄糖10，

豆餅粉10， FeSO₄ 0.5，

K₂HPO₄0.2，NaCl 0.01，

MgSO₄ 0.1，CaCO₃ 60，

在對罐內物質進行100℃滅菌20～30分鐘后，冷至40℃以下，加入單獨滅菌的CaCO₃，接種曲霉₁₆₃孢子后，在25～34℃通氣攪拌培養(yǎng)，通氣量0.15～0.3vvm，罐壓維持100kPa，按每50升罐加20毫升的量加入泡敵抑制泡沫生成，培養(yǎng)18～20小時后接入生產罐；

2.1.3發(fā)酵--將經2.1.2步驟后的接種物在生產罐內采用進行發(fā)酵培養(yǎng)，生產罐裝有下述發(fā)酵培養(yǎng)基(克/升)：

經去毒處理后的蘋果渣60，葡萄糖15，

豆餅粉10，FeSO₄0.5，

K₂HPO₄0.2，NaCl 0.01，

MgSO₄0.1，CaCO₃60，

發(fā)酵培養(yǎng)基除CaCO₃以外，直接在生產罐內配制，在緩慢攪拌下直接通蒸汽升溫至100℃，維持20分鐘滅菌，冷至40℃時，加入經120℃干熱2小時的單獨滅菌的CaCO₃；當品溫降到35℃時，接種10％種子培養(yǎng)基液，通氣攪拌進行發(fā)酵，發(fā)酵時控制溫度25℃～34℃，通氣量0.4vvm，攪拌轉速90r/min，發(fā)酵24小時后，加入罐內物料量0.2％的解脂假絲酵母ATTCC₈₆₆₂細胞混合酶液，繼續(xù)發(fā)酵過程約需30～40小時，待殘?zhí)墙档?克/升以下，得成熟的濃漿狀發(fā)酵醪；

2.1.4提取蘋果酸--將經1.2.3步驟后得到的發(fā)酵醪放入酸解糟中，用無砷硫酸在攪拌下緩緩進行酸解至pH2.0～4.0，一般為pH2.5，酸解2個小時后，采用鹼中和，過濾，再重復1次，然后，選擇D301為提純L-蘋果酸的樹脂，對生產中混合料液的L-蘋果酸溶液進行分離，分離條件為pH＝3.4，流速＝1.5～2.5毫升/分。