[發(fā)明專利]依那普利用藥指導(dǎo)基因檢測(cè)試劑盒

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811286720.3
• 申請(qǐng)日: 2018-10-31
• 公開（公告）號(hào): CN111118136A
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬慶偉;鐘逾;劉昕超
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京毅新博創(chuàng)生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明提供一種利用不同單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點(diǎn)具有不同分子量的延伸引物，從而通過(guò)基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI?TOF MS)同時(shí)檢測(cè)多個(gè)位點(diǎn)，最終實(shí)現(xiàn)降高血壓藥物依那普利的用藥的方法和試劑盒。本發(fā)明能同時(shí)檢測(cè)6個(gè)依那普利藥物代謝相關(guān)的SNP位點(diǎn)，并具有成本低、無(wú)需合成探針、耗時(shí)短、結(jié)果分析簡(jiǎn)單便捷、應(yīng)用領(lǐng)域極其廣泛的優(yōu)點(diǎn)，能夠有效的減少依那普利用法用量相關(guān)不良事件的發(fā)生和血栓性疾病的預(yù)防?？梢杂糜谂R床需要服用依那普利的高血壓患者的輔助診斷、治療。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，涉及一種利用質(zhì)譜特征峰圖檢測(cè)多重PCR單堿基延伸產(chǎn)物的方法及其產(chǎn)品，該方法可以在兩個(gè)多重PCR反應(yīng)中同時(shí)檢測(cè)多個(gè)PCR單堿基延伸擴(kuò)增的寡核苷酸產(chǎn)物。更具體的說(shuō)，該方法利用不同目的寡核苷酸片段在質(zhì)譜分型過(guò)程中生成的不同的時(shí)間飛行質(zhì)譜特征峰圖，針對(duì)多個(gè)目的SNP位點(diǎn)同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，指導(dǎo)降高血壓藥物依那普利的用藥。

背景技術(shù)

人類的遺傳信息儲(chǔ)存在基因組中，2002年國(guó)際合作項(xiàng)目人類基因組計(jì)劃的最終完成，繪制出了人類基因組結(jié)構(gòu)的精細(xì)圖，為相關(guān)研究提供了參考序列。人類基因組序列共由30億個(gè)堿基組成，大量研究表明，人群中1％的遺傳差異大約占基因組序列的0.1％左右，即大約300萬(wàn)個(gè)堿基的差異，在人群中超過(guò)1％的變異頻率。這些差異極有可能是造成兩個(gè)人之間個(gè)體差異的遺傳因素。發(fā)現(xiàn)這些位點(diǎn)，可廣泛地應(yīng)用于遺傳標(biāo)記的研究、評(píng)估個(gè)體遺傳關(guān)系、評(píng)估物種進(jìn)化等研究領(lǐng)域。

在人類基因組中，約90％的差異是以單個(gè)核苷酸的形式體現(xiàn)出來(lái)的，這樣的差異位點(diǎn)被稱作單核苷酸多態(tài)性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP)。SNP具有兩個(gè)顯著的特點(diǎn)：一是數(shù)目眾多，據(jù)估計(jì)人類基因組中的SNP數(shù)目約在1100萬(wàn)左右，目前NCBI dbSNP數(shù)據(jù)庫(kù)中已收錄來(lái)源于人類基因組的SNP達(dá)1083萬(wàn)，其中經(jīng)過(guò)確認(rèn)的為644萬(wàn)(截至2007年8月22日)，如此大量的SNP方便了選擇合適的位點(diǎn)進(jìn)行疾病研究，也使得絕大多數(shù)基因組區(qū)域在SNP覆蓋范圍內(nèi)；另外一個(gè)特點(diǎn)是SNP位點(diǎn)大多數(shù)為雙態(tài)，即在一個(gè)位點(diǎn)上僅有兩種表現(xiàn)形式(基因型)，這樣很容易就能設(shè)計(jì)出高通量自動(dòng)化的檢測(cè)方法。正因?yàn)檫@兩個(gè)特點(diǎn)，使得SNP位點(diǎn)越來(lái)越受到研究者的青睞，被譽(yù)為是繼限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RestrictionFragment Length Polymorphism，RFLP)和短串聯(lián)重復(fù)序列(short tandem repeat，STR)之后的第三代分子標(biāo)記物。人類基因組計(jì)劃完成前后，基因組學(xué)研究的重點(diǎn)逐漸轉(zhuǎn)向SNP領(lǐng)域，因此，SNP在遺傳標(biāo)記學(xué)、生物群體遺傳學(xué)、生物分類學(xué)、遺傳育種學(xué)、物種或人類進(jìn)化學(xué)、法科學(xué)、藥物基因組學(xué)等領(lǐng)域都有重要的應(yīng)用。

心血管疾病是全球人類健康的首要疾病負(fù)擔(dān)。我國(guó)心血管病患病率處于持續(xù)上升階段。高血壓是最常見(jiàn)的心血管疾病之一，也是心血管病的主要危險(xiǎn)因素。高血壓病人全球約有6.9億人，發(fā)病率高達(dá)31.3％。流行病學(xué)研究顯示，血壓水平與心血管病發(fā)病率呈線性相關(guān)；血壓升高是腦卒中和冠心病發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。高血壓是引起危及生命的心、腦血管病如心肌梗死、腦卒中、腎臟功能不全等的主要原因。因此，有效控制血壓對(duì)防止高血壓患者心腦血管并發(fā)癥的發(fā)生具有重大的臨床意義。

臨床上用于治療高血壓的藥物主要分為五類：利尿劑、β-腎上腺素受體阻滯劑、鈣拮抗劑、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑和血管緊張素II受體拮抗劑。后兩者都是作用于RAAS系統(tǒng)的抗高血壓藥物。為了降低相關(guān)的病死率及致殘率，高血壓患者通常需要長(zhǎng)期服用降壓藥物。降高血壓藥物依那普利為血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)?？诜笤隗w內(nèi)水解成依那普利拉，對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶起強(qiáng)烈抑制作用，降低血管緊張素Ⅱ的含量，造成全身血管舒張，血壓下降，是治療高血壓的常用藥物。

藥物基因組學(xué)已成為指導(dǎo)臨床用藥、評(píng)估嚴(yán)重藥物不良反應(yīng)發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的重要工具。通過(guò)檢測(cè)藥物代謝酶和藥物靶點(diǎn)基因，可指導(dǎo)臨床醫(yī)生針對(duì)特定患者選擇合適的降壓藥物和給藥劑量，提高降壓藥物治療的有效性和安全性。藥物發(fā)揮作用的各個(gè)環(huán)節(jié)都可能因基因變異而表現(xiàn)出明顯的差異性反應(yīng)。藥物作用的差異表現(xiàn)為藥物動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)的差異。