[發明專利]利用乳化法制備解磷微生物緩釋海藻酸鈉微球的方法

有效

• 申請號: 201811286376.8
• 申請日: 2018-10-31
• 公開（公告）號: CN109321558B
• 公開（公告）日: 2022-12-06
• 發明（設計）人: 肖春橋;池汝安;徐廣
• 申請（專利權）人: 武漢工程大學
• 主分類號: C12N11/10
• 分類號: C12N11/10;C12N11/04
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 崔友明;閉釗

1.利用乳化法制備解磷微生物緩釋海藻酸鈉微球的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(a)以低品位磷礦粉為馴化劑，對磷礦礦區微生物菌群或農田土壤微生物菌群進行篩選、富集、馴化，得到目標解磷微生物菌群備用；

篩選過程具體如下：按照50-100g：1L的比例將磷礦礦區土壤或農田土壤與無菌水混合，攪拌均勻后取上層渾濁液，依次用紗布、濾紙過濾多次，所得濾液即為篩選好的初始菌液；

富集過程具體如下：將體積比為8-30:1的富集培養基和篩選好的初始菌液置于培養器中，在28-30℃下恒溫振蕩培養3-5天，取第一次培養后的菌懸液按照同樣的方法重復培養3-4次，得到富集好的解磷微生物菌群懸浮液；

馴化過程具體如下：將體積比為5-15:1的馴化培養基和富集好的解磷微生物菌群懸浮液置于培養器中，在28-30℃下恒溫振蕩培養3-5天，取第一次馴化培養后的菌懸液按照同樣的方法重復馴化培養3-4次，在此過程中逐漸提高馴化培養基中低品位磷礦的含量，最終得到目標解磷微生物菌群；

(b)將培養好的目標解磷微生物菌群加入到海藻酸鈉溶液中，得到解磷微生物菌群-海藻酸鈉混合溶液；

(c)配制W/O型反向乳液：將液體石蠟加入到乳化劑中攪拌均勻即可，所述乳化劑選自吐溫80、司盤80、蔗糖硬脂酸酯或其他非離子型乳化劑中的一種或幾種；

(d)按照1:2-10的體積比將微生物菌群-海藻酸鈉混合溶液加入到W/O型反向乳液中，超聲攪拌10-60min，再加入質量分數為0.1％-10％且相當于W/O型反向乳液體積0.4-1.0倍的CaCl₂溶液后以100-400rpm的轉速攪拌10-60min，接著靜置10-40min后加入有機溶劑，以5000-8000g的離心力進行離心，分離得到下層微球，反復用有機溶劑和無菌水洗滌3-6次，最后在-50℃至-30℃環境下冷凍干燥6-10h，得到解磷微生物緩釋海藻酸鈉微球；所述有機溶劑選自石油醚、丙酮、乙酸乙酯中的一種或幾種。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述富集培養基按照重量份數計的配方為：葡萄糖10.0份，(NH₄)₂SO₄ 0.1份，MgSO₄或其水合物0.25份，KCl 0.2份，MgCl₂或其水合物0.5份，Ca₃(PO₄)₂ 1份，蒸餾水1000份，pH＝7.0；所述馴化培養基按照重量份數計的配方為：葡萄糖10.0份，(NH₄)₂SO₄ 0.1份，MgSO₄或其水合物0.25份，KCl 0.2份，MgCl₂或其水合物0.5份，低品位磷礦粉1-5份，蒸餾水1000份，pH＝7.0。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(a)中所得目標解磷微生物菌群為混懸液或者冷凍離心后的菌泥。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(b)中解磷微生物菌群-海藻酸鈉混合溶液中海藻酸鈉的質量分數為0.5％-3％，目標解磷微生物菌群與海藻酸鈉的質量比為1:5-10；步驟(c)中乳化劑和液體石蠟的體積比為1:10-50。

5.權利要求1-4任意一項制得的解磷微生物緩釋海藻酸鈉微球作為微生物肥料的應用。