[發明專利]利用銳孔法制備解磷微生物緩釋海藻酸鈉微球的方法

有效

• 申請號: 201811286347.1
• 申請日: 2018-10-31
• 公開（公告）號: CN109439645B
• 公開（公告）日: 2022-07-19
• 發明（設計）人: 肖春橋;池汝安;徐廣
• 申請（專利權）人: 武漢工程大學
• 主分類號: C12N11/10
• 分類號: C12N11/10;C12N11/04;C12N1/36;C05F11/08
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 崔友明;閉釗

1.利用銳孔法制備解磷微生物緩釋海藻酸鈉微球的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（a）以低品位磷礦粉為馴化劑，對磷礦礦區微生物菌群或農田土壤微生物菌群進行篩選、富集、馴化，得到目標解磷微生物菌群備用；

（b）將培養好的目標解磷微生物菌群加入到海藻酸鈉溶液中，得到解磷微生物菌群-海藻酸鈉混合溶液；

（c）通過針孔將解磷微生物菌群-海藻酸鈉混合溶液滴加到CaCl₂溶液中，固化0.5-1h后過濾，所得固體物質用水分散后超聲振蕩5-20min后再次過濾，重復分散-過濾3-5次，最后自然風干得到粒徑為2mm-3.3mm的微球；

步驟（a）中馴化方法如下：將體積比為5-15:1的馴化培養基和富集好的解磷微生物菌群懸浮液置于培養器中，在28-30℃下恒溫振蕩培養3-5天，取第一次馴化培養后的菌懸液按照同樣的方法重復馴化培養3-4次，在此過程中逐漸提高馴化培養基中低品位磷礦的含量，最終得到目標解磷微生物菌群；所述馴化培養基按照重量份數計的配方為：葡萄糖10.0份，(NH₄)₂SO₄ 0.1份，MgSO₄或其水合物0.25份，KCl 0.2份，MgCl₂或其水合物0.5份，低品位磷礦粉1-5份，蒸餾水1000份，pH=7.0；

步驟（b）所述解磷微生物菌群-海藻酸鈉混合溶液中還包括含量為2-20 g/L的致孔劑，所述致孔劑具體為碳酸氫鈉。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（a）中篩選方法如下：按照50-100g：1L的比例將磷礦礦區土壤或農田土壤與無菌水混合，攪拌均勻后取上層渾濁液，依次用紗布、濾紙過濾多次，所得濾液即為篩選好的初始菌液。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（a）中富集方法如下：將體積比為8-30:1的富集培養基和篩選好的初始菌液置于培養器中，在28-30℃下恒溫振蕩培養3-5天，取第一次培養后的菌懸液按照同樣的方法重復培養3-4次，得到富集好的解磷微生物菌群懸浮液，所述富集培養基按照重量份數計的配方為：葡萄糖10.0份，(NH₄)₂SO₄ 0.1份，MgSO₄或其水合物0.25份，KCl 0.2份，MgCl₂或其水合物0.5份，Ca₃(PO₄)₂ 1份，蒸餾水1000份，pH=7.0。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（b）中將培養好的目標解磷微生物菌群加入到質量分數為0.5%-3%的海藻酸鈉溶液中，目標解磷微生物菌群與海藻酸鈉溶液的體積比為1:4-15。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（c）中針孔的孔徑為0.2mm-0.5mm，液滴下落高度為6-15cm，注射速度為1-10mL/min，保持液滴勻速滴入質量分數為0.5%-5%的CaCl₂溶液中。

6.如權利要求1-5任一項所述的方法，其特征在于，該方法還包括步驟（d）：將步驟（c）制得的微球分散在殼聚糖溶液中，振蕩處理后固液分離，得到二次包覆的解磷微生物緩釋海藻酸鈉微球。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于：步驟（d）中利用0.1-1mol/L的稀醋酸水溶液作溶劑，配制質量分數為0.1%-2%的殼聚糖溶液，微球與殼聚糖溶液的質量比為1:2-5，振蕩處理時間為10-30min，振蕩處理完成后過濾，自然風干。