[發(fā)明專利]利用土曲霉菌株生產(chǎn)4-O-去甲基巴爾巴地衣酸進而合成合成橡苔的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811285482.4
• 申請日: 2018-10-31
• 公開（公告）號: CN109666707B
• 公開（公告）日: 2022-04-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 呂雪峰;黃雪年;張偉;李鴻成
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學院青島生物能源與過程研究所
• 主分類號: C12P7/62
• 分類號: C12P7/62;C12P7/40;C12R1/66
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 田鴻儒

本發(fā)明公開了一種利用土曲霉菌株生產(chǎn)4?O?去甲基巴爾巴地衣酸進而合成合成橡苔的方法，涉及新菌株、微生物發(fā)酵技術(shù)及化學合成技術(shù)領(lǐng)域，所述土曲霉菌株為土曲霉(Aspergillus terreus)MEFC06，土曲霉菌種發(fā)酵培養(yǎng)；分離純化得到4?O?去甲基巴爾巴地衣酸，將4?O?去甲基巴爾巴地衣酸水解為2,4?二羥基?3,6?二甲基苯甲酸；采用甲基化試劑進行甲酯化反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后處理即可得到2,4?二羥基?3,6?二甲基苯甲酸甲酯(合成橡苔)。提供了新的微生物發(fā)酵與化學合成相結(jié)合來生產(chǎn)合成橡苔的方法，綠色生態(tài)，合成路線短，工藝簡單，產(chǎn)量高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及新菌株、微生物發(fā)酵技術(shù)及化學合成技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用土曲霉菌株生產(chǎn)4-O-去甲基巴爾巴地衣酸進而合成合成橡苔的方法。

背景技術(shù)

橡苔是一種稀有的地衣資源，一般指生長在橡樹樹干和枝條上的松蘿科扁枝衣屬的櫟扁枝衣，橡苔浸膏和精油被廣泛應(yīng)用于香水、護膚品、香煙和熏香等日用品，同時，橡苔也作為食品添加劑應(yīng)用于飲料、烘焙食品、布丁、軟糖等。天然橡苔主要產(chǎn)自于歐洲中南部和北非一代地中海沿岸國家，如法國、意大利等。我國橡苔資源極其稀少，僅在云南開發(fā)了橡苔I號和II號，由于地衣原料不同使得香氣有很大的區(qū)別，主要作為煙草香精使用。

橡苔浸膏和精油作為一種天然產(chǎn)物制品，其市場和應(yīng)用存在一些先天不足。首先，天然橡苔資源稀缺，售價高昂。其次，由于原料來源、提取工藝的差異使得橡苔品質(zhì)不一，而且企業(yè)為降低成本會對產(chǎn)品進行調(diào)配，使得市場混亂。另外，天然橡苔浸膏和精油是一種混合物，成分復(fù)雜，其中部分化合物已被認定為過敏原，歐盟化妝品法規(guī)對這些致敏原物質(zhì)的使用作出了規(guī)定和限制。上述不利因素都限制了橡苔的市場應(yīng)用，因此，鑒定天然橡苔的主要呈香化合物并開發(fā)其生產(chǎn)工藝受到了企業(yè)和科研人員的關(guān)注。研究表明2,4-二羥基-3,6-二甲基苯甲酸甲酯(1CAS:4707-47-5)是橡苔中的主香化合物，因此該化合物被稱為合成橡苔。關(guān)于合成橡苔的化學合成路線已經(jīng)有文獻和專利報道，其中大部分合成路線中都是以不同原料合成關(guān)鍵中間體2,5-二甲基間苯二酚(2CAS:488-87-9)和2,4-二羥基-3,6-二甲基苯甲酸(3CAS:4707-46-4)最后生成2,4-二羥基-3,6-二甲基苯甲酸甲酯，制備過程如圖1所示。但是，在實際生產(chǎn)中，這兩個關(guān)鍵中間體的制備工藝復(fù)雜，并且收率較低、成本較高，因此采用化學方法生產(chǎn)合成橡苔的方法在實際應(yīng)用中存在一定的缺陷，限制了合成橡苔市場的發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述化學方法生產(chǎn)合成橡苔的方法在實際應(yīng)用中存在的問題，本發(fā)明提供一種產(chǎn)生4-O-去甲基巴爾巴地衣酸(CAS:20372-89-8)的土曲霉菌株、該菌株在發(fā)酵生產(chǎn)4-O-去甲基巴爾巴地衣酸中的應(yīng)用，及利用上述土曲霉菌株發(fā)酵生產(chǎn)4-O-去甲基巴爾巴地衣酸進而合成2,4-二羥基-3,6-二甲基苯甲酸甲酯的方法，同時還提供了利用4-O-去甲基巴爾巴地衣酸合成2,4-二羥基-3,6-二甲基苯甲酸甲酯(即合成橡苔)的方法。

首先，本發(fā)明提供一種產(chǎn)生4-O-去甲基巴爾巴地衣酸的土曲霉菌株，所述土曲霉菌株為土曲霉(Aspergillus terreus)MEFC06，已于2018年6月21日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏中心登記入冊編號為：CGMCC No.15890。

第二，本發(fā)明提供上述產(chǎn)生4-O-去甲基巴爾巴地衣酸的土曲霉菌株在發(fā)酵生產(chǎn)4-O-去甲基巴爾巴地衣酸中的應(yīng)用，包括以下步驟：

步驟一、土曲霉種子液的制備，種子液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)；

步驟二發(fā)酵液分離純化得到4-O-去甲基巴爾巴地衣酸。

步驟一中所述種子液的制備，具體為：將土曲霉MEFC06接種到PDA平板培養(yǎng)基上，28℃培養(yǎng)2-9天，將平板上的孢子接種到種子培養(yǎng)基中，接種量為10⁶-10⁸個/35mL，28℃、220rpm搖床培養(yǎng)培養(yǎng)1-5天，得到種子液。