[發明專利]一種組合微生物分段固體發酵生產生物飼料的方法

在審

• 申請號: 201811281613.1
• 申請日: 2018-10-31
• 公開（公告）號: CN111109428A
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發明（設計）人: 孫維國;陳龍
• 申請（專利權）人: 寧夏乙征生物工程有限公司
• 主分類號: A23K10/12
• 分類號: A23K10/12;A23K10/37;A23K10/33
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種組合微生物分段固體發酵生產生物飼料的方法，其特征在于，其具體生產步驟如下：

S1、菌種培養：

一、黑曲霉和綠色木霉培養：取500g的麩皮，然后用水對麩皮進行清洗，清洗至麩皮上沒有沾染的淀粉，然后將麩皮取出瀝干水，之后將麩皮放入烘干室進行脫水烘干，麩皮烘干完成后，將其分裝若干個在500ml的三角瓶中，每個三角瓶中裝50g的麩皮，每個三角瓶的瓶口用絨布和牛皮紙封口，將絨布和牛皮紙扎緊，然后將三角瓶放入滅菌鍋中進行滅菌，滅菌鍋里面的溫度控制在120-122℃，當滅菌鍋里面的溫度山上升至規定溫度時，三角瓶在滅菌鍋里面保溫40min，之后將其取出，待三角瓶的溫度自然冷卻至室溫后，分別接入黑曲霉和綠色木霉斜面菌種，其中黑曲霉和綠色木霉各接種5瓶；然后將接種完成的三角瓶放入培養箱培養，培養箱中的溫度控制在28-30℃，三角瓶里面的黑曲霉和綠色木霉菌種在培養箱里面培養7天，每天對麩皮翻面一次，至培養基長滿孢子，然后向每瓶三角瓶中加入100ml的無菌水制成孢子懸浮液備用；

二、酵母菌培養：取酵母膏6g，蛋白胨12g，葡萄糖12g，將它們全部溶于600ml的水中，然后將溶液平均分裝到250ml的三角瓶中，每個三角瓶中裝有50ml的溶液，之后用絨布和牛皮紙對三角瓶封口并扎緊，然后將三角瓶放入滅菌鍋中滅菌，滅菌鍋里面的溫度控制在114-116℃，當滅菌鍋里面的溫度山上升至規定溫度時，三角瓶在滅菌鍋里面保溫25min后取出，待三角瓶的溫度自然冷卻至室溫后接入酵母斜面菌種，然后將三角瓶置于搖床機里面培養，搖床機里面的溫度控制在29-31℃，搖床的轉速為180rpm,三角瓶里面的酵母菌在搖床機里面培養24h，取出備用；

三、枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌培養：取豆粕粉30g，玉米淀粉20g，葡萄糖5g，硫酸錳0.2g，將它們全部溶解到1000ml的水中，然后將溶液分裝到500ml的三角瓶中，每個三角瓶中裝100ml的溶液，之后對三角瓶封口，之后將三角瓶置于滅菌鍋進行滅菌，滅菌鍋里面的溫度在120-122℃，當滅菌鍋里面的溫度達到規定溫度后，三角瓶在滅菌鍋里面保溫25min，然后取出使其自然冷卻至室溫，之后接入枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌斜面菌種，其中枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌各接種5瓶；然后將接種好的三角瓶放入搖床機里面進行搖床培養，搖床培養的溫度控制在34-36℃，轉速控制在180rpm,三角瓶里面的枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌，在搖床機里面培養12h之后取出備用；

四、乳酸菌培養：取葡萄糖35g，豆粕40g，玉米漿干粉30g，硫酸錳0.05g,然后將它們溶解在1000ml的水中，之后將溶液均勻分裝到500ml的三角瓶中，每個三角瓶中的溶液為100ml，之后用絨布與牛皮紙對三角瓶封口并扎緊，將三角瓶置于滅菌鍋進行滅菌，乳酸菌的滅菌溫度控制在120-122℃，當滅菌鍋里面的溫度達到乳酸菌滅菌規定溫度后，停止溫度上升三角瓶在滅菌鍋里面保溫25min后取出，待三角瓶的溫度自然冷卻至室溫后接入乳酸菌斜面菌種；然后對其進行搖床培養，乳酸菌搖床培養時搖床機里面的溫度控制在35-37℃，轉速控制在50rpm,三角瓶里面的乳酸菌在搖床機里面培養12h之后取出備用；

S2、固體發酵培養基制備：取棉籽粕1300g，葡萄皮渣320g，麩皮280g，糖蜜100g，將它們倒入900ml的水里面，進行攪拌使其混合均勻，然后將其裝在5000ml的玻璃抽濾瓶里面，之后用絨布和牛皮紙對玻璃抽濾瓶封口，用抽濾扣扎緊，將玻璃抽濾瓶置于滅菌鍋里面進行滅菌，玻璃抽濾瓶在滅菌鍋里面的滅菌溫度為120-122℃，當滅菌鍋里面的溫度上升至規定的滅菌溫度后停止溫度上升，玻璃抽濾瓶在滅菌鍋里面保溫40min，之后將其取出待其自然冷卻后備用；

S3、固體發酵：

第一階段發酵：將黑曲霉、綠色木霉和酵母均的培養菌種按2:2：1的比例，以5％接種量從培養瓶的抽濾口接入到固體培養基中并進行震蕩，震蕩均勻后將其置于搖床機進行培養，搖床培養的溫度控制在28-30℃，搖床的轉速控制在200rpm，至培養基里面長滿菌絲結束第一階段發酵；

第二階段發酵：將枯草芽孢桿菌與地衣芽孢桿菌的菌種，按1:1的比例混合后，按10％的接種量，從培養瓶的抽濾口接入到第一階段發酵結束后的固體培養基中，震蕩均勻后將固體培養基放回原搖床機里面繼續培養，搖床培養的溫度控制在34-35℃，搖床的轉速為200rpm，之后對其取樣鏡檢，待取樣中有芽孢生成即可終止第二階段的發酵；

第三階段發酵：將乳酸菌的菌種按10％的接種量從培養瓶抽濾口接入第二階段發酵結束的固體培養基中并進行震蕩，震蕩均勻后將其放入原搖床機里面繼續進行培養，搖床培養的溫度控制在35-37℃，然后每4h開啟一次搖床機震蕩5min，搖床轉速為200rpm，培養的過程中檢測到發酵基質的pH發生了變化，第三階段發酵結束時發酵基質的pH為4.6，此時整個發酵終止；

S4、產品干燥、檢測：發酵完成后對固體培養基中的物質進行干燥，采用氣流干燥機進行干燥,控制氣流干燥機的溫度為40-45℃,干燥后得到發酵產品，然后對發酵產品進行其他指標檢測分析。