[發明專利]一種用于白血病高通量藥物篩查的方法

在審

• 申請號: 201811279792.5
• 申請日: 2018-10-30
• 公開（公告）號: CN111118099A
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發明（設計）人: 周碧柳;陸益;李均翔;董云加;俞劍鋒;沈麗霞
• 申請（專利權）人: 啟迪漢洱康（嘉興）生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02
• 代理公司: 杭州知管通專利代理事務所(普通合伙) 33288
• 代理人: 羅佩芝

本發明提供了一種用于白血病高通量藥物篩查的方法，步驟如下：血液腫瘤干細胞的分離提取鑒定培養：進行骨髓樣本的采集；進行單個核細胞的分離；通過免疫磁珠法分離白血病干細胞群；將磁珠分離純化后細胞進行傳代培養；建立藥物庫：根據藥物說明書及藥物動力學，選擇藥物濃度，同血液腫瘤干細胞混合培養，分析藥物對血液腫瘤干細胞的抑制作用。本發明高通量藥物篩查方法可以針對患者個性化精準的給出合適的治療方案意見，為復發難治性患者爭取寶貴的治療時機，減少試藥風險，最大程度的增加藥物療效和減少藥物副作用，同時可以做藥物組合，針對臨床常用化療藥物組合做一個綜合評分，為醫生在為患者制定臨床聯合用藥方面提供參考。

技術領域

本發明涉及一種用于白血病高通量藥物篩查的方法。

背景技術

John Dick在急性粒細胞白血病(AML)患者中分離純化了CD34⁺/CD38^-表型的AML細胞，將這類細胞接種于NOD/SCID小鼠，可以產生類似人類的白血病，而CD34^-/CD38⁺表型的白血病細胞卻不易形成腫瘤，因此推測CD34⁺/CD38^-表型白血病細胞是AML干細胞。進入21世紀后，人們在實體瘤(最早是在乳腺癌和腦瘤)中同樣分離和驗證了癌干細胞，徹底宣告了癌干細胞時代的到來。腫瘤干細胞是指具有干細胞特性的腫瘤細胞，具有“自我更新”和“多向分化”的能力，通常這類的細胞被認為有形成腫瘤，發展成癌癥的潛力，特別是隨著癌癥轉移出去后，產生新型癌癥的來源，是腫瘤復發的種子。在功能實驗中被定義為當移植進免疫缺陷小鼠體內時能形成腫瘤和自我更新的細胞。有研究表明：把小鼠白血病細胞移植到同品系的小鼠體內，發現移植細胞僅僅有1％-4％能夠形成脾臟內克隆，這說明，只有部分腫瘤細胞具有致瘤性。在白血病中，僅有萬分之一的細胞具有這種無限增值的潛能，但是它們數量雖少，但具有干細胞的特征，可能是唯一保持增值的腫瘤細胞，這種細胞稱為腫瘤干細胞。

腫瘤細胞是一種變異的細胞，是產生癌癥的病原，這些細胞也可以持續增值分化，形成相對成熟的腫瘤細胞，他們不能再增值，不能形成細胞集落，或者腫瘤細胞僅能夠分裂幾次，體外克隆培養只能形成幾個或者幾十個細胞經短暫的分化最終死亡，而其中的腫瘤干細胞才能夠持續的增值，形成細胞集落，它們對腫瘤的形成和生長過程中起決定性作用，這一小部分具有干細胞性質的腫瘤干細胞，具有無限的自我更新、多向分化潛能與高度增值能力，能夠產生不同表型的腫瘤細胞，并賦予腫瘤異質性、增值、浸潤、轉移等特性。

在癌癥治療基礎研究中，關于癌癥的起源研究是攻克癌癥的理論基石。克隆演化學說與癌干細胞學說是解釋癌癥起源的兩大主線。克隆演化學說強調細胞隨機獲得累積突變而具備持久增殖的能力，而癌干細胞學說強調腫瘤組織內的層級性——只有極少數的原初突變細胞才具有持久的增值能力。不過我們必須認識到，兩種學說并非互不相容。克隆演化學說可以是建立在癌干細胞學說基礎上的。我們可以說，細胞通過自然選擇而具備廣泛增殖的能力，這個細胞就成為了癌干細胞。而這種自然選擇，可以建立在多種組織生態復雜性因素的任何可能因素之上。克隆演化學說的核心，就是“變化”。癌干細胞的基因型和表型在癌癥演進過程中也是不斷變化的，它唯一不變的特征就是廣泛的自我更新能力。很多治療方案只是給癌干細胞提供了另一種生存和增殖的方向。所以，我們一方面相信癌干細胞學說在解釋癌癥起源問題上的合理性，另一方面也要意識到，癌干細胞具有復雜的基因多樣性，這在治療方案的選擇上尤其需要注意。

大量研究表明，白血病患者體內存在一群極微量的細胞群，約占所有白血病細胞的0.1％～1％，這些細胞通常對化療藥物不敏感，是導致白血病復發的罪魁禍首。無論在長期的細胞培養中還是動物模型體內它們都能引起并維持白血病，這群白血病細胞被稱為白血病干細胞(leukem ia stem cells,LSC)。白血病，是一種起源于造血干細胞的血液系統惡性疾病，發病率有逐年上升的趨勢。盡管目前的治療能使大部分患者獲得完全緩解，但其療效至今仍沒有取得突破性進展，大約70％的患者仍然會復發。復發的根本原因是LSC的存在。因此，LSC是影響AML 患者療效和獲得長期存活的關鍵因素，有效清除LSC是目前治療AML的難點和瓶頸。