[發明專利]一種確定污水處理好氧反硝化菌最適保存溫度的方法

有效

• 申請號: 201811277233.0
• 申請日: 2018-10-30
• 公開（公告）號: CN111006991B
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 王碩;石巖;呂慧;李激;王燕
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N15/14
• 分類號: G01N15/14
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

1.一種確定好氧反硝化菌最適保存溫度的方法，其特征在于，所述方法是利用流式細胞術測定不同溫度保存的好氧反硝化菌的細胞活性狀態，將最接近好氧反硝化菌在中試運行中的細胞活性狀態的保存溫度確定為最適保存溫度；所述好氧反硝化菌細胞活性狀態的測定包括活細胞、凋亡早期細胞、凋亡晚期細胞和死細胞的含量測定；

所述利用流式細胞術確認最適溫度的方法包括：

(1)好氧反硝化菌測試樣液的制備：用緩沖液稀釋好氧反硝化菌樣品，混合均勻后過濾取沉淀，離心，留用上清液，使用預冷緩沖液吹洗細胞，重復離心和清洗兩次，再取上清液作為樣品，使用適量10x Annexin V Binding Buffer混勻制得；

(2)置于流式細胞儀測定各樣液的細胞活性狀態；

所述流式細胞儀測定各樣液的細胞活性狀態是在對照FITC Annexin V組加入0.5μlPI染色劑，對照PI組加入0.5μl FITC Annexin V，檢測組加入0.5μl FITC Annexin V和0.5μl PI，混勻后室溫下避光孵育10～20min，之后于流式細胞儀上機檢測。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述緩沖液的pH為7.3～7.6。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述緩沖液包括磷酸鹽緩沖液。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述緩沖液包括(8～28)％v/v磷酸二氫鈉和(72～92)％v/v磷酸氫二鈉。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述緩沖液與好氧反硝化菌的稀釋體積比為4～10：1。

6.根據權利要求1～5任一所述的方法，其特征在于，所述過濾是利用孔徑6～15μm的尼龍膜。

7.一種快速啟動好氧反硝化菌的方法，其特征在于，是利用權利要求1～5任一所述方法確定最適保存溫度，在最適保存溫度下，將培養成熟的好氧反硝化菌置于保存基質中進行保存，活性恢復后即可啟動好氧反硝化菌工程。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述保存基質的COD濃度為100～150mg/L,NH₄⁺-N濃度為27.5～38.5mg/L，NO₃^--N濃度為4.5～8.0mg/L。

9.一種污水處理的方法，其特征在于，是利用權利要求7或8所述方法快速啟動好氧反硝化菌工程。