[發明專利]一種人類膚質快速檢測組合引物及其應用

在審

• 申請號: 201811276285.6
• 申請日: 2018-10-30
• 公開（公告）號: CN109234406A
• 公開（公告）日: 2019-01-18
• 發明（設計）人: 侯俊笛;鄶斌;李潔璇;毛燕;鄭彥麗
• 申請（專利權）人: 深圳市萬眾基因轉化醫學研究院
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 合肥中博知信知識產權代理有限公司 34142
• 代理人: 李德勝

1.一種人類膚質快速檢測組合引物，其特征在于：所述組合引物包括皮膚美白相關基因位點：IRF4基因上的rs12203592位點、HREC2基因上的rs12913832位點、SLC45A2基因上的rs16891982位點，皮膚保濕相關基因位點：ST14基因上的rs137852931位點、FLG基因上的rs11103631位點、AQP3基因上的rs17553719位點，皮膚彈性相關基因位點：MMP1基因上的rs1799750位點、MMP3基因上的rs3025058位點、ELN基因上的rs7787362位點，皮膚敏感性相關基因位點：TLR1基因上的rs5743611位點、TLR2基因上的rs5743704位點、TLR6基因上的rs5743810位點；所述組合引物包含了所有所選位點的正向引物和反向引物，如IRF4基因的rs12203592位點的引物包含了正向引物序列SEQ ID NO:1和反向引物序列SEQ ID NO:2，其它位點的引物序列詳見引物序列詳情表。

2.權利要求1所述的組合引物在制備人類膚質快速檢測試劑盒中的應用。

3.如權利要求2所述的人類膚質快速檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括權利要求1所述的組合引物和一組包含飽和染料的PCR反應mix，所述組合引物的序列如SEQ IDNO:1-24所示。

4.權利要求3所述的試劑盒在人類膚質快速檢測方法中的應用。

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于：包括以下步驟：

1)樣品采集、DNA提取和PCR擴增引物的設計：所述擴增引物設計為權利要求1所述的組合引物；

2)高分辨率溶解熒光定量PCR擴增上述組合引物：將步驟1)中不同的組合引物按照等比例混合，混合后作為一個的引物池，按照試劑盒要求配置反應體系，體系如下：

用此引物按照熒光定量PCR的方法進行擴增，擴增條件如下：95℃預變性10min；然后按95℃變性10s，65-55℃退火10s，每個循環下降0.5℃，72℃延伸30s的程序進行45個循環；擴增出的DNA片段即為擴增文庫；

3)步驟2)中的DNA片段按照高分辨率熔解曲線法進行高分辨率溶解曲線過程，擴增產物的熔解步驟在PCR循環結束后立即進行，程序為：升溫至95℃1min，然后降溫至40℃1min，再升溫至65℃1s。從65℃連續升溫到95℃的過程中進行熒光收集，25次/℃，最后，降溫至40℃。

6.如權利要求5所述的應用，其特征在于：所述組合引物為12對組合引物，上游組合引物與下游組合引物之間的退火溫度在3度內，且引物對與引物對之間形成的引物二聚體的△G的絕對值小于5。